Identificación de secuencias involucradas en la reactividad cruzada entre proteínas de soja y de leche bovina por métodos inmunoquímicos y computacionales

RENATA,CURCIARELLO; VIRGINIA, GONZÁLEZ; GUSTAVO, PARISI; SILVANA, PETRUCCELLI; GUILLERMO, DOCENA

Viña del mar, CHILE

Congreso; VI Encuentro Latinoamericano y del Caribe de Biotecnología Agropecuaria; 2007

REDBIO

La soja es un importante alergeno alimentario, que debe ser estudiado en más detalle por susaplicaciones en la elaboración de un gran número de alimentos. Con el fin de desarrollarmétodos que permitan una mejor predicción de la alergenicidad de proteínas vegetales en estetrabajo nos centramos en la reactividad cruzada entre proteínas de soja y de leche bovina (LB).Este sistema es de sumo interés en Argentina, ya que la leche de soja es el principal sustitutoempleado en el tratamiento de lactantes alérgicos a LB. Sin embargo aproximadamente el 40%de estos pacientes no toleran la leche de soja aún sin haber estado expuestos previamente aestas proteínas. El objetivo de este trabajo fue identificar los componentes y regiones dereactividad cruzada y, empleando la información de secuencias disponibles en base de datos,predecir los epitopes responsables de la misma. Por inmunoblotting de extractos proteicos desoja y componentes de soja recombinantes, con un suero policlonal específico de leche yanticuerpos monoclonales contra caseínas bovinas, se identificó a la subunidad alfa-betaconglicinina,como nuevo componente reactivo. En un ensayo de ELISA de inhibición, laactividad del suero policlonal frente a LB, fue inhibida por concentraciones crecientes deproteínas de soja. Una región, alfa-CTD, que abarca el dominio C-terminal de alfa-betaconglicinina,obtenida por expresión en E.coli mostró reactividad por inmunoblotting frente a losdistintos anticuerpos empleados y también por ELISA indirecto con el suero policlonal. Por últimofue reconocido por el 93,3% de los sueros de individuos alérgicos a LB, en un ensayo de ELISAindirecto. Estos resultados indican que el alfa-CTD es una de las regiones de reactividad de laalfa-beta-conglicinina. Mediante el uso de diversos métodos de predicción de epitopes seobtuvieron péptidos de proteínas de soja y LB con los cuales se realizaron análisis in silico paraidentificar regiones implicadas en la reactividad cruzada. De los resultados obtenidos seidentificaron regiones con similitud secuencial entre las diferentes subunidades de la betaconglicininay las caseínas de la LB que podrían estar implicadas en la reactividad cruzadaobservada in vitro