Evaluación de diferentes métodos para la cuantificación de melatonina en sobrenadantes libres de células de aislamientos bacterianos ambientales

JUAREZ TOMAS, SILVINA; ALBERTO, MARIA ROSA; DANILOVICH, MARIANA ELIZABETH

San Miguel de Tucuman

Congreso; III Jornadas de Microbiología sobre temáticas específicas del NOA 2019; 2019

Asociación Argentina de Microbiología

La melatonina (N-acetil-5-metoxitriptamina) es una indolamina ubicua presente en plantas,microorganismos y humanos. En humanos, esta sustancia modula diversos procesosfisiológicos, incluidos el ciclo de sueño, metabolismo y sistema inmunitario. Adicionalmente,la melatonina (MEL) es un potente antioxidante empleado como ingrediente de complementosalimenticios. Actualmente, existen pocos métodos para la detección y cuantificación de estasustancia, tales como HPLC con detector UV-visible con arreglo de diodos (HPLC-DAD) o defluorescencia (HPLC-FLD), HPLC-MS-MS, GC-MS e inmunoensayos (ELISA). No obstante,la mayoría de las técnicas son costosas y requieren de grandes cantidades de solventes yequipamientos específicos, por lo cual no pueden ser utilizadas como técnicas de rutina. Enestudios previos, se evaluó la producción de MEL por aislamientos bacterianos ambientales(Pseudomonas sp. P26, Gordonia sp. H19 y Rhodococcus sp. F27, 016, 20 y P18) en medioLuria Bertani suplementado con 500 mg/L de triptófano como precursor. En sobrenadanteslibres de células (SLC), se cuantificó la concentración de MEL por HPLC-DAD empleando unacolumna C18. Los objetivos de este trabajo fueron ensayar la rápida detección de MEL enSLC luego de 48 h de cultivo, empleando un método colorimétrico basado en el reactivo deSalkowski, y comparar los resultados obtenidos con los datos previamente determinados porHPLC-DAD. Para el desarrollo del método colorimétrico se construyó una curva de calibracióncon un estándar puro de MEL en el rango de concentraciones de 7,8 a 250 μg/mL, realizandopor duplicado barridos espectrofotométricos para cada concentración de MEL. En las mezclasde reacción, se observó una coloración marrón característica con el incremento de laconcentración de MEL. Mediante análisis estadísticos se determinó el rango óptimo deabsorción de MEL (entre 450 y 481 nm). Debido a que no se encontraron diferenciasestadísticamente significativas (prueba de Tukey) entre las absorbancias registradas en elrango mencionado, la curva de calibración del estándar se construyó a 450 nm. Por el métodocolorimétrico, se estimó una concentración de MEL de 43,64 μg/mL en cultivos de Gordoniasp. H19 y de 149,45 μg/mL en Rhodococcus sp. F27 en SLC sin concentrar, mientras que porHPLC-DAD se estimaron concentraciones de 60,07 μg/mL y 74,40 μg/mL, respectivamente,en SLC concentrados (4,005 μg/mL y 4,96 μg/mL en SLC sin concentrar). En los SLC del restode los microorganismos se registraron valores de absorbancia a 450 nm empleando el métodocolorimétrico, mientras que por HPLC-DAD no se detectó la presencia de MEL.Probablemente, estos microrganismos producen otros compuestos indólicos que sondetectados por el reactivo de Salkowski. En base a los resultados obtenidos, se concluye queel método colorimétrico ensayado no resultó adecuado ni específico para el estudio de laproducción bacteriana de MEL, bajo las condiciones de cultivo evaluadas.