La desorganización del citoesqueleto induce cambios en la distribución de nanoagregados del receptor de acetilcolina en la superficie celular estudiado mediante microscopía de alta resolución (STED)

M. VIRGINIA BORRONI; STEFAN HELL; FRANCISCO J. BARRANTES

La Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XXXVII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Biofisica; 2008

Sociedad Argentina de Biofisica

La desorganización del citoesqueleto induce cambios en la distribución de nanoagregados del receptor de acetilcolina en la superficie celular estudiado mediante microscopía de alta resolución (STED) La organización supramolecular del receptor de acetilcolina nicotínico muscular adulto (AChR) expresado en células de mamífero ha podido ser resuelta recientemente (Kellner et al., 2007) mediante microscopía de depleción de emisión estimulada ("STED", revisión en Hell, 2007), con resolución por debajo del límite de difracción. El AChR se organiza en forma de agregados con tamaños del orden de nanómetros. En este trabajo aplicamos la microscopía STED para estudiar el efecto de la disrupción del citoesqueleto sobre la distribución del AChR en la membrana celular. Se marcó el AChR presente en la superficie de células CHO-K1/A5 con anticuerpo monoclonal mAb-210 y anticuerpo secundario conjugado con la sonda fluorescente Atto-647N. Mediante análisis estadístico de las imágenes de STED se comprobó en primer lugar que los nano-agregados ("nanoclusters")de AChRs expresados a baja densidad en superficie ( partícula/mm2), exhiben un aumento del diámetro de alrededor del 30% cuando se tratan las células con jasplakinolide, una droga que desorganiza el citoesqueleto. En el caso de otro disruptor de la red de actina cortical, la citocalasina D, no se observaron cambios estadísticamente significativos del diámetro de partículas. Sin embargo, ambos compuestos aumentaron significativamente la relación brillo (intensidad de fluorescencia)/ diámetro con respecto a los controles. Este hallazgo es interpretable como un aumento en la densidad de moléculas de AChR por nano-agregado. Los resultados ponen en evidencia la importancia del citoesqueleto en la organización supramolecular del AChR en la membrana plasmática.