Aplicación de la resonancia de espín electrónico (ESR) a la determinación de óxido nítrico en hígado

MONICA LILIANA GALLEANO; LUCILA AIMO; MARIA VIRGINIA BORRONI; SUSANA PUNTARULO

La Plata

Congreso; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 1998

Sociedad Argentina de Biofísica

Aplicación de la resonancia de espín electrónico (ESR) a la determinación de óxido nítrico en hígado Monica Liliana GALLEANO, Lucila Aimo, Maria Virginia Borroni, Susana Puntarulo En este trabajo se ha aplicado la técnica de atrapamiento de spin para determinar los niveles de oxido nítrico (NO) en hígado de rata in vivo utilizando dietilditiocarbamato(DETC). El complejo estable Bis (ditiocarbamato)-Fe-NO (DETC2-Fe-NO) fue determinado por ESR en homogeneizado de hígado a temperatura ambiente. Las determinaciones se llevaron a cabo en un espectrómetro Broker ECS 106 ESR bajo las siguientes condiciones: poder de microondas 20 mW, frecuencia de microonda 9.81 GHz, amplitud de modulación 6.175 G, tiempo de barrido 84 s, constante de tiempo 164 ms, centro de campo 3450 G y ancho de barrido 150 G. Los espectros obtenidos mostraron solo el triplete característico de la señal del DETC2-Fe-NO, se calcularon las áreas bajo la curva correspondiente a la doble integral de la señal y los resultados se expresaron como unidades arbitrarias (UA). El diseño experimental incluyo 4 grupos: 1) Control (solución salina ip); 2) LPS (lipopolisacárido de Escherichia coli ? LPS- 4 mg/Kg peso ip); 3) Fe (hierro dextrán 200 mg Fe/kg peso ip) y 4) Fe + LPS (hierro dextrán 200 mg Fe/Kg peso y LPS 4 mg/Kg peso ip). Al cabo de 5 h de tratamiento, los animales fueron inyectados ip con DETC (2.2 mmol/Kg) y 30 min después fueron obtenidas las muestras de hígado. Los resultados fueron 0.2±0.1; 4.2±0.7; 1.5±0.2 y 6.6±1.3 UA para los grupos control, LPS, Fe y Fe + LPS respectivamente. Los niveles de NO2- y NO3- plasmáticos fueron 31±4; 209±12; 40±7 y 204±10 µM para los grupos control, LPS, Fe y Fe + LPS respectivamente, indicando un perfil similar al obtenido con DETC2-Fe-NO. Los resultados sugieren que la determinación de los niveles de óxido nítrico por ESR utilizando DETC como atrapador constituye una técnica simple y sensible para estudiar el metabolismo del NO en hígado in vivo y que correlaciona adecuadamente con el indicador sistémico de producción de NO (NO2- + NO3- plasmáticos). Financiado por la Universidad de Buenos Aires (TB063) y CONICET.