IQUIBA-NEA   25617
INSTITUTO DE QUIMICA BASICA Y APLICADA DEL NORDESTE ARGENTINO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Rol de las proteasas del veneno de Bothrops alternatus en las alteraciones de la hemostasia secundaria
Autor/es:
FUSCO, L; MARUÑAK SILVANA; LAURA C. LEIVA; GAY C.; VAN DE VELDE, A
Lugar:
Corrientes
Reunión:
Jornada; Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas; 2018
Institución organizadora:
Universidad Nacional del Nordeste
Resumen:
Bothrops alternatus es una serpiente de importancia sanitaria en el centro y el norte de Argentina. El envenenamiento botrópico provoca proteólisis detejidos, hemorragia y trastornos de la coagulación. La hemorragia es el resultado de la alteración en la interacción entre plaquetas, factores de lacoagulación y la pared vascular, donde el endotelio cumple un papel fundamental. El fenómeno fisiológico que detiene el sangrado se conoce comohemostasia. La respuesta hemostática ha sido clasificada en tres procesos: la hemostasia primaria donde participan fundamentalmente el endotelioy las plaquetas, la hemostasia secundaria que comprende la activación del sistema de coagulación y la fibrinólisis que involucra la degradación de la mallade fibrina. Dado el grado de afectación que inducen los venenos botrópicos en la hemostasia ha cobrado importancia el conocimiento acerca de lamanera en que las toxinas alteran el adecuado funcionamiento de la circulación sanguínea y el sistema vascular. De todos los componentes, lasmetaloproteinasas y las serinoproteinasas de veneno de serpientes (del inglés: SVMPs y SVSPs, respectivamente) debido a su capacidad de clivarel enlace peptídico de sustratos clave, constituyen las principales toxinas involucradas en la fisiopatología de la intoxicación botrópica. Teniendo encuenta su elevada proporción en la secreción de B. alternatus, un 24% de SVSPs y más de un 43% de SVMPs, fue de interés dilucidar la contribuciónde estas enzimas en las alteraciones de la hemostasia secundaria que desencadena este veneno. Para ello se llevaron a cabo estudios del veneno invitro, sobre plasma citratado y fibrinógeno (Fg), en presencia de anticuerpos específicos (IgG anti-balt) y de inhibidores químicos de metalo- yserinoproteasas: etilendiaminotetraacetato disódico (EDTA-Na2) y fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), respectivamente; e in vivo para cuantificar elconsumo de Fg por parte de las proteasas del veneno. En cuanto a los ensayos in vitro, el tiempo de coagulación (TC) fue registrado enfrentandoplasma citratado a una solución de veneno (270 ug/mL), como así también a veneno pre-incubado con EDTA-Na2, con PMSF, con ambos inhibidoresen conjunto y veneno pre-incubado con IgG anti-balt (relación 1/20). Los resultados mostraron que el veneno-EDTA-Na2 y el veneno-IgG anti-baltalargaron 3,5 y 3,3 veces, respectivamente, el TC respecto al control de veneno, mientras que para el veneno-PMSF se registró un TC 7,7 veces másprolongado respecto al control. Asimismo se registró el TC sobre Fg utilizando las mismas muestras y no se observó cambios en el registro del TC en elcontrol de veneno y el veneno inhibido por EDTA-Na2 e IgG anti-balt, sin embargo no se observó la formación de malla de fibrina cuando se expuso elFg al veneno-PMSF. Para los ensayos in vivo, se determinó la concentración de fibrinógeno en plasma citratado de grupos de ratones inoculados por víaintravenosa con tampón fosfato salino, veneno (20 y 40 ug) y veneno-IgG anti-balt (veneno/anti-balt: 20/600 ug y 40/1200 ug). Tanto los ratonesinoculados con la dosis más alta de veneno como aquellos inoculados con veneno-IgG anti-balt, presentaron un plasma incoagulable lo cual indicódepleción de Fg circulante. Se comprobó así que las SVMPs afectan la hemostasia secundaria, bajo una acción conjunta con las serinoproteinasas. Elalargamiento en el TC observado sobre plasma, y ?no sobre fibrinógeno?, por parte del veneno bloqueado tanto con EDTA-Na2 como con IgG anti-balt,dejó en evidencia que las SVMPs tienen un rol pro-coagulante. La incapacidad de formar la malla de fibrina por parte del veneno bloqueado con PMSFreflejó el rol exclusivo de las SVSPs con actividad símil trombina. Los anticuerpos no fueron capaces de neutralizar la actividad coagulante del veneno,siendo entonces las SVSPs los principales componentes responsables de provocar depleción de fibrinógeno por consumo. En conclusión, el presentetrabajo permite reconocer a las SVMPs como toxinas claves en las alteraciones hemostáticas que pueden conducir a la muerte en elenvenenamiento por B. alternatus. Esta información podría ser relevante para el diseño de inmunobiológicos más específicos, tendientes a optimizar laactual seroterapia antiofídica.