DESARROLLO DE UN PROTOCOLO EFICIENTE PARA LA OBTENCIÓN DE DOBLE HAPLOIDES EN ARVEJA (Pisum sativum L.)

BERMEJO, CAROLINA; COINTRY, ENRIQUE LUIS

Rosario

Congreso; XXI Congreso y XXXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario (SBR) 2019; 2019

SBR

Un factor limitante en el mejoramiento en arveja es el tiempo que lleva la obtención de nuevas líneas puras ya que el nivel deseado de homocigosis se alcanza en la F6 a F8. La homocigosis puede ser alcanzada de manera rapida por haploidización de híbridos usando cultivo de anteras y duplicando los cromosomas de plantas haploides. Sin embargo esta tecnología no ha sido desarrollada de manera exitosa en legumbres de grano. Como objetivo se propone optimizar un protocolo de cultivo de anteras en arveja para ser utilizado en la aceleración de generaciones. Como material vegetal se utilizaron 11 variedades de arveja de distintas subespecies. Se sembraron a campo y se extrajeron las yemas florales cuando alcanzaron una longitud aproximada de 6-7mm que corresponde al estado uninucleado. Las mismas se sometieron a dos tratamientos, 1) sin pre-tratamiento de frío, 2) pre-tratamiento de frío a 4ºC por 3 días. Luego se esterilizaron en alcohol 70% por 1min, hipoclorito de sodio al 25% por 10 min y 3 enjuagues con agua destilada estéril. Se aislaron las anteras y se cultivaron in vitro en medios de inducción de callos conteniendo MS al 6% de sacarosa y 0.6% de agar con distintas concentraciones (0, 0.5 y 1 mg/L, Medio 1, 2 y 3, respectivamente) de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) y pH 5.5. Se mantuvieron durante 1 mes en cámara de cultivo a 16hs de luz y 25ºC. Luego se transfirieron a medio de inducción de tallos conteniendo MS al 3% de sacarosa, 0.6% de agar, 5 mg/L de BAP y 1 mg/L de ácido α-naftalenacético (NAA). Por último los tallos se transfirieron a medios de enraizamiento conteniendo ½ MS al 4% de sacarosa, 0.6% de agar, 0.25 mg/L de IAA y 0.25 mg/L de NAA. El experimento se repitió 3 veces. Se evaluaron las frecuencias de callos obtenidos, % de regeneración de tallos y raíces. Se evaluaron los efectos de genotipo, medios de cultivo y pre-tratamiento y debido a que las variables no siguieron una distribución normal se realizó un Test de Kruskal-Wallis usando el programa Infogen. Los porcentajes de regeneración de callos fueron significativamente superiores para las yemas florales sin pretratamiento de frío comparadas con las sometidas al pre-tratamiento a 4 ºC (H=11,25, p