Validación molecular de híbridos heterocigotas para estudios de resistencia al tizón de tallo y vaina y decaimiento de semilla de la soja mediante marcadores de tipo Polimorfismo de Nucleótido Simple (SNPs)

PERUZZO, A.M.; PRATTA, G.R.; MALONE, G.; PIOLI, R.N.; HERNANDEZ, F.E.; FERRARI, B.

Rosario

Congreso; XX Congreso y XXXVII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2018

Sociedad de Biología de Rosario

En la actualidad, la agricultura enfrenta nuevos desafíos desde el manejo del cultivo para incrementar la productividad de manera sustentable con el ambiente y la calidad de vida urbana y rural. El Tizón de Tallo y Vaina y el Decaimiento de Semillas (TTVyDS) causada por Phomopsis longicolla (Plo) y Phomopsis phaseoli var. sojae (Pps) es una de las enfermedades más relevantes del cultivo por ser un factor limitante para el rendimiento y la calidad del grano, semillas y derivados del cultivo de soja. La obtención de cultivares con resistencia genética parecería ser la estrategia más efectiva y eficiente de lograr una producción de cultivos sustentable a largo plazo. Por ello, es necesario conocer las bases genéticas subyacentes a la resistencia/susceptibilidad de la especie, así como identificar nuevos genes. Para identificar y caracterizar la herencia de estos genes, se realizaron cruzamientos entre progenitores resistentes (R) y susceptibles (S). El objetivo de este trabajo fue validar la filiación de las generaciones F1 obtenidas con marcadores SNPs, verificando la heterocigosis en relación a los alelos discrepantes que sus padres portaban en homocigosis. Para ello, se realizó un genotipado por secuenciación en base a 1224 SNPs. El análisis de cada padre y F1 se realizó en placas micro-tituladoras de 96 pocillos (wells) totales y se contó con una muestra única para cada padre e individuo F1. Las muestras fueron procesadas y analizadas mediante un Secuenciador (Ion Gene Studio S5 Next-Generation Sequencing Systems for Targeted Sequencing). Este análisis permite asignar el genotipo de cada F1 y sus padres, esperándose que la F1 sea heterocigota para cada SNP en el que los padres fueron homocigotas y discrepantes. De un total de 148 cruzamientos realizados, 47 resultaron efectivos y fértiles con producción de vainas con semillas F1. De éstos, la caracterización molecular permitió validar 34 individuos F1 como verdaderos híbridos, demostrando que la efectividad de los cruzamientos fue alta (72,34%) para la producción de semillas de la filial F1. Cabe destacar que algunas semillas F1 (tres individuos provenientes de 2 cruzamientos) no germinaron, impidiendo la extracción de ADN, y en consecuencia la evaluación de la efectividad del cruzamiento. Por su parte, 6 individuos fueron detectados molecularmente como no heterocigotas, representando cruzamientos no efectivos, y en 4 los resultados fueron indeterminados debido a que aquellos SNPs polimórficos entre los padres no amplificaron para el individuo F1. La caracterización molecular mediante SNPs resultó útil para la identificación inequívoca de las filiales F1 provenientes de cruzamientos efectivos y brindó información complementaria sobre la diversidad genética entre los progenitores.