INMOVILIZACIÓN DE TRIPSINA EMPLEANDO UN NOVEDOSO SOPORTE DE PET CON POLIMEROS BIOINSPIRADOS

CABEZUDO, I.; ROMANINI, D.; MARTINEZ BILESIO, A.; BORTOLATO, S.; MARIÑO, E.P.; LEDESMA, J.

Los Cocos, Córdoba

Simposio; XII Simposio arg. de polímeros; 2017

La inmovilización de enzimas es una alternativa ecológica de catálisis que puede aplicarse a los procesos biotecnológicos con el fin de contribuir a tecnologías limpias que permiten la reutilización de estos catalizadores biológicos. La tripsina (TRP) bovina es una eficiente enzima proteasa de alto valor comercial y con múltiples aplicaciones.Los copolímeros biodegradables derivados de la timina (base piridínica constituyente del ADN) se denominan comúnmente como ?bioinspirados? ya que, si bien se obtienen por síntesis química, sus monómeros provienen del ADN, un biopolímero natural. Presentan la particularidad de formar mallas de entrecruzamiento cuando son irradiados con luz UV (photo-crosslinking), y unirse al politereftalato de etileno, el PET. Estos copolímeros de vinil-bencil-timina (VBT) y vinil-fenil-sulfonato (VPS) son solubles en agua, ambientalmente benignos y poseen una alta densidad de carga negativa en un amplio rango de pH [1]. En este trabajo nos hemos propuesto evaluar la capacidad de los polímeros VBT:VPS (1:1, 1:4 y 1:8) de formar complejos insolubles con TRP como punto de partida de una estrategia de inmovilización empleando como soporte el PET para uso en biorreactores. La precipitación de TRP-copolímero se optimizó por medio de un diseño estadístico en el cual se lograron ajustar las condiciones del medio y las concentraciones adecuadas de las especies. Luego se ensayaron estrategias de inmovilización donde la más eficiente consistió en colocar una gota de volumen conocido de del complejo precipitado sobre el PET para luego someterla al entrecruzamiento con la luz UV. El soporte con el complejo inmovilizado, sometidos a condiciones adversas para una enzima, demostró robustez catalítica apreciable, tanto en presencia del sustrato específico como en su capacidad proteolítica sobre otra enzima: alfa-amilasa. La malla de copolímero-TRP-PET demostró alta resistencia mecánica y capacidad catalítica demostrada aun luego de 3 ciclos sin precedentes en la bibliografía respecto de la inmovilización de enzimas con copolímeros bioinspirados.