MEDIOS DE CULTIVO DE BAJO COSTO PARA LA PRODUCCIÓN DE BIOSURFACTANTES BACTERIANOS

TADDÍA, ANTONELA; HAIDAR, CARLA N.; PELLEGRINI MALPIEDI, LUCIANA

Misiones, Argentina

Simposio; XVI Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos (SAPROBIO); 2021

Universidad Nacional de Misiones, Instituto de Biotecnología de Misiones.

Introducción: Los biosurfactantes (BS) son moléculas tensoactivas producidas por una gran variedad de microorganismos, los cuales poseen varias ventajas respecto a los surfactantes de origen sintético. Pseudomonas syringae, es un bacilo Gram-negativo productor de BS, secreta poderosos lipopéptidos con propiedades fisicoquímicas prometedoras en distintos campos de aplicación. Por otro lado, las formulaciones de BS son relativamente costosas, una posible solución a dicha problemática, se ha centrado en el reemplazo total o parcial de las fuentes de carbono/nitrógeno incorporando desechos recalcitrantes y/o sub-productos de bajo costo en los medios de cultivo de producción. El objetivo de este trabajo fue realizar la selección del medio de cultivo óptimo para producir BS por parte de Pseudomona syringae pv tabaci, utilizando como fuente de carbono desechos, tales como aceite de cocina residual provenientes de locales gastronómicos y glicerol proveniente de la industria del biodiesel. Metodología: Se evaluó la mayor capacidad productiva de biosurfactante, utilizando un diseño factorial con tres factores: relación de la cantidad de aceite y glicerol, concentración de NaNO3 y concentración de vitaminas. El crecimiento bacteriano fue monitoreado mediante determinación de densidad óptica (600nm) y la producción de BS mediante el índice de emulsificación (IE) y peso seco. Los cultivos se realizaron en un volumen final de 100mL, se incubaron a 28°C y 150rpm por 72hs. Se extrajeron los BS por precipitación ácida y luego se re-suspendieron en agua carbonatada a pH 7,4. A esta solución se la llamó extracto crudo. La metodología para determinar el IE consistió en mezclar iguales volúmenes de extracto crudo y kerosene. Dicha mezcla se dejó en reposo hasta lograr el equilibrio y se midió el porcentaje del volumen total ocupado por la emulsión. La determinación del peso seco de BS consistió en realizar una extracción con acetato de etilo sobre el extracto crudo en una relación 2:1, luego 24hs de incubación en agitación se retira la fase orgánica, se la coloca en un recipiente de vidrio para completar la evaporación del acetato de etilo. Posteriormente, se vuelve a colocar un volumen de acetato de etilo al extracto crudo remanente, repitiendo el procedimiento descripto tres veces y logrando una masa constante de BS. La selección de las mejores condiciones de producción se realizó con ayuda del programa estadístico Minitab 17, empleando un nivel de confianza del 95%. Resultados: Se determinó que el medio compuesto por una relación de 0,9g aceite/0,1g glicerol, concentración de NaNO3 10g/L y sin vitaminas agregadas sería el medio de cultivo más adecuado para la producción de BS a partir de P. syringae pv tabaci. En estas condiciones se obtuvo el mayor valor de peso seco de BS, 180mg cada 100mL de cultivo. Además, se trata de un medio de cultivo formado por aceites de cocina residual proveniente de locales gastronómica, glicerol refinado y sales, lo cual disminuiría el costo del producto final. Conclusiones: Se logró hallar un medio de cultivo de bajo costo para la producción de BS a partir de P. syringae pv tabaci, empleando aceite de cocina residual, glicerol y sales.