Utilización de Tetrahymena Thermophila como modelo de expresión de la proteína de anclaje glicofosfatidilinositol, GP60 de Cryptosporidium parvum

ELGUERO ME; TOMAZIC M; MONTES MG; NUDEL BC; SCHNITTGER L; NUSBLAT AD

Capital Federal

Congreso; XXVII Reunión Anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2015

Sociedad Argentina de Protozoología

Cryptosporidium parvum es un protozoo parásito del phylum Apicomplexa causante la criptosporidiosis, enfermedad quegenera diarreas en terneros neonatos y es responsable de la mortalidad de animales en nuestro país e importantespérdidas económicas en la actividad ganadera. Uno de los principales determinantes de los diferentes subtipos deCriptosporidium es la proteína de superficie GP60. Esta proteína, al igual que la mayoría de las proteínas de superficie delphylum, se encuentran unidas a la membrana por un anclaje de tipo glicofosfatidilinositol (GPI), un glicósidofrecuentemente implicado en procesos de reconocimiento, adhesión y/e invasión a las células hospedadoras. Estascaracterísticas convierten a las proteínas GPI en moléculas esenciales para la superviviencia de los protozoos, ejerciendo unfuerte efecto inmunomodulador en el organismo hospedador, lo que las convierte en candidatos vacunales de gran valorbiotecnológico. En este trabajo se realizó la expresión heteróloga del antígeno GP60 de C. parvum en el ciliadoTetrahymena thermophila, el cual ha demostrado ser capaz de expresar, plegar y procesar correctamente otras proteínasdel tipo GPI provenientes de diferentes protozoos parásitos. Para su realización se utilizó la estrategia de transformación encepas conjugantes de T. thermophila, utilizando vectores episomales de ADN ribosómico y expresando la proteína GP60bajo el promotor de MTT1 inducible por Cadmio. Se evaluó mediante Western Blot con anticuerpos específicos la presenciade GP60, y se observó que T. thermophila es capaz de procesar esta proteína en una variante de 40 kDa. Esta variante semantuvo incluso luego del enriquecimiento en fracción GPI indicando que éste ciliado no solo es capaz de expresar sinotambién de realizar las modificaciones post-traduccionales necesarias para la obtención del antígeno GP60 proveniente de C. parvum.