ITA-NOA   24624
INSTITUTO DE TECNOLOGIA AGROINDUSTRIAL DEL NOROESTE ARGENTINO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Obtención de plantas transgénicas del portainjerto cítrico Flying Dragon
Autor/es:
GOMEZ, R., SENDIN, L., ROMERO, L., INSAURRALDE, MP., CASTAGNARO, A. Y FILIPPONE, MP.; SENDIN, L.; R
Lugar:
San Miguel de Tucumàn
Reunión:
Congreso; X Simposio Nacional de Biotecnologia RedBio; 2015
Institución organizadora:
REDBIO Argentina
Resumen:
Argentina es el primer productor mundial de limón y el 90% de la producción nacional se concentra en la provincia de Tucumán. Tradicionalmente el mejoramiento genético de los cítricos se realiza mediante hibridación sexual, la cual presenta numerosas dificultades relacionadas principalmente con la biología reproductiva del cultivo. La transgénesis mediada por Agrobacterium tumefaciens (At) ha permitido superar algunas de las dificultades del método tradicional y ya se han obtenido numerosos genotipos de portainjertos y copas transgénicos. Sin embargo, aun existen genotipos para los cuales no se dispone de un protocolo de transformación optimizado, como es el caso del portainjerto Flying Dragon (FD) (Poncirus trifoliata L. Raft var. monstruosa), uno de los más utilizados para las variedades de Citrus limon en nuestra región. El objetivo de este trabajo fue ajustar una metodología de transformación mediada por At que permita obtener plantas transgénicas enteras de FD. Como fuente de explantos se utilizaron segmentos internodales de epicótilo provenientes de plántulas germinadas in vitro de 6 semanas de edad (tejido juvenil), los cuales fueron inoculados con la cepa de At EHA105 portadora del vector de transformación pCAMBIA2301, que contiene el gen de selección nptII (neomicina fosfotransferasa II) y el gen reportero gus (β-glucuronidasa). Los explantos fueron cultivados de forma horizontal y vertical en un medio basal adicionado con 3 mg/L de citoquinina 6-bencilaminopurina (BAP) en presencia del agente de selección (kanamicina 50 mg/L). A los sesenta días se verificó la expresión del gen reportero gus en los brotes regenerados mediante tinción histoquímica de una pequeña porción correspondiente un segmento basal de los mismos, y se observó que la eficiencia de transformación para los explantos incubados de forma vertical fue de 10%; y para los horizontales 24,28%. Los brotes GUS positivos fueron incubados de forma vertical en un medio basal sin hormonas no selectivo, para disminuir la concentración de citoquininas en el tejido vegetal. A los treinta días los brotes fueron transferidos a un medio de inducción de enraizamiento durante cinco-seis días y mantenidos en un medio reducido sin hormonas hasta formación de raíces. Finalmente, para ajustar un protocolo de rusticación se evaluaron cuatro tipos de sustratos, de los cuales el constituido por una medida de turba/ dos de perlome permitió la recuperación del 100% de las plántulas. El protocolo publicado en este trabajo permitiría la obtención de plantas de FD que expresen genes de interés agronómico, cuya característica podría transferirse a la copa no transgénica, aumentando las posibilidades de desregular eventos en menos tiempo, mejorando la percepción pública y, en definitiva, haciendo viable el uso de esta tecnología en la industria citrícola.