INVESTIGADORES
SANTOS Javier
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio del desplegado y la estabilidad de la enzima HPRT de Trypanosoma cruzi.
Autor/es:
VALSECCHI WANDA; PABLO ROSI; JAVIER SANTOS; JOSÉ MARÍA DELFINO
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
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La familia de las fosforribosiltranferasas (PRT) catalizan la transferencia del grupo fosforribosil del fosforribosilpirofosfato (PRPP) a una base purínica1. Dentro de esta familia han sido caracterizadas una amplia variedad de enzimas, entre las que se encuentran la adenina fosforribosiltransferasa (APRT), hipoxantina-guanina-xanthina PRT (HGXPRT), hipoxantina PRT (HPRT), orotato PRT (OPRT), uracil PRT (UPRT) y xantina-guanina PRT (XPRT)2. La HPRT es una proteína globular de cerca de 220 residuos que cuenta con dos dominios con estructura alfa/beta3. Es una enzima que tiene dos funciones descriptas: regeneracion de la hipoxantina y guanina. Como resultado, se obtiene IMP y GMP, sustratos esenciales para la supervivencia de los tripanosomatidos. En este trabajo expresamos en forma recombinante la HPRT de E.coli para estudiar la estabilidad y el estado de agregacion, en presencia de ligandos. Para ello, purificamos esta enzima mediante el agregado de seis histidinas en el extremo C terminal, obteniendo una proteina enzimáticamente activa. Experimentos de SEC-FPLC muestran que la enzima puebla una conformación dimerica en ausencia de ligandos. Caracterizamos el estado conformacional de la proteína mediante dicroísmo circular (CD). Observamos un estado nativo con un contenido de estructura secundaria compatible con la estructura nativa. La proteína tiene tendencia a agregar, además de una alta inestabilidad frente a tratamientos de congelamiento (-20°C) y descongelamiento. El efecto de la urea y la temperatura sobre la fluorescencia de las tirosinas muestran un panorama complejo con por lo menos tres transiciones conformacionales. Exploramos también el efecto sobre la estabilidad del pamidronato, un inhibidor moderado de la actividad enzimática.
