INVESTIGADORES
SANTOS Javier
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio del desplegado de la TRX de E. coli: rol de la hélice α C-terminal en la estabilización del estado de transición y del estado nativo.
Autor/es:
DIEGO S. VAZQUEZ; LUCIA B. CHEMES; IGNACIO E. SÁNCHEZ; MAURICIO P. SICA; JAVIER SANTOS
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica, Instituto Leloir
Resumen:
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--La
tiorredoxina de Escherichia
coli (TRX) es una
proteína de 108 residuos que presenta un plegadocompuesto por 5 hebras
beta rodeadas por 5 hélices alfa. Es altamente soluble, y
termodinámicamente estable en un amplio rango de temperatura (DGH20=
8 kcal/mol
a 25 °C). Estas características la convierten en un buen modelo
para estudios de plegado. Estudios de complementación entre el
modulo TRX1-93 y el péptido TRX94-108 silvestre o conteniendo
mutaciones de L por A en las posiciones 94, 99, 103 y 107 (Santos,
2009) demostraron que la hélice C-terminal (HCT) aporta
interacciones claves en la estabilización del complejo,
y que su presencia es requerida para la adquisición de estructura
terciaria. Ciertamente la HCT juega un papel importante en la
adquisición de la conformación nativa, pero ¿Cuál es el rol de la
HCT en la ruta de plegamiento de la TRX? Estudios recientes de
nuestro grupo utilizando simulaciones de dinámica molecular
indicaron la presencia de un intermediario con un alto número de
contactos nativos en el cual la HCT pierde su estructura helicoidal,
y un estado de transición de plegado (TS) con estructura
preponderantemente
β. En forma coincidente, la presencia de intermediarios de replegado
con estructura β pudo ser inferida a partir de experimentos de
cinética rápida
(Georgescu, 1998). Nuestra hipótesis es que la adquisición de la
HCT es un evento tardío en el proceso de plegado de la TRX. Para
investigarlo diseñamos una serie de mutantes puntuales. Mediante la
medición de relaciones entre las energías libres cinéticas y de
equilibrio de las diferentes mutantes de la HCT y de la proteína
silvestre, conocido como análisis de valores F
(Fersht, 1992), nos proponemos determinar si la HCT se encuentra o no
estructurada en el estado de transición de plegado.
