ANÁLISIS DEL GEN VITELOGENINA EN EL VECTOR DEL HLB Diaphorina citri

LITWIÑIUK S.L.; MIRETTI M.; FIORAVANTE C.A.; BLARIZA M.J.

Simposio; 6º Simposio de Procesos Biotecnológicos (SAPROBIO); 2021

El psílido asiático de los cítricos (ACP), Diaphorina citri (Hemíptera: Psyllidae), constituye la principal amenaza para la industria citrícola en todo el mundo, ya que es el vector de la bacteria Candidatus liberibacter ssp., agente causal de la enfermedad “Huanglongbing" (HLB). El HLB es una de las enfermedades de los cítricos más devastadoras del mundo que hasta el momento no tiene cura, por lo que las plantas afectadas deben erradicarse y destruirse causando pérdidas en la producción en las regiones afectadas. No existen métodos de control eficaces para el HLB; sin embargo, técnicas biotecnológicas emergentes tales como, el ARN de interferencia, podrían servir como una posible estrategia sostenible y respetuosa con el medio ambiente para el manejo de esta plaga citrícola. Ciertas características tales como las aplicaciones fáciles y focalización altamente específica hacen que los enfoques de ARNi sean deseables para el desarrollo de nuevas estrategias contra muchos insectos plaga. A efectos de aportar bases que podrían orientar en el futuro el desarrollo de nuevas estrategias de control se analizó el gen que codifica para vitelogenina (Vg), fosfoglicoproteína precursora de la vitelina que constituye el principal componente de la yema del huevo. Con el propósito de analizar a este gen involucrado en el proceso de ovogénesis, se realizó una extracción de ARN total de hembras y machos adultos por separado, se cuantificó la concentración obtenida, posteriormente se realizó la síntesis de ADNc empleando 1 ug de ARN total y luego se diseñaron primers que se amplificaron mediante sucesivas reacciones de PCR end point. Con el fin de corroborar la correcta amplificación de los segmentos de ADNc, los productos de PCR fueron visualizados en geles de agarosa. Aquellos productos de PCR que revelaron banda única del tamaño esperado, se purificaron y se enviaron para su secuenciación directa. Se logró amplificar 3194 pb correspondientes a la porción N-terminal del gen. El análisis de las secuencias de aminoácidos deducidos a partir de las secuencias nucleotídicas de ADNc de D. citri permitió localizar un sitio de clivaje altamente conservado en el extremo N-terminal, RXXR (RSRR), donde el producto primario de Vg se escinde por endoproteasas. Este sitio se encuentra flaqueado por dos regiones poliserinas, las cuales corresponden a sitios de fosforilación imprescindibles para la interacción entre Vg y su receptor en la superficie del ovocito en desarrollo. Por otra parte, el análisis comparativo de las secuencias de aminoácidos deducidos a partir de las secuencias nucleotídicas de ADNc de D citri reveló un porcentaje de aminoácidos idénticos del 48.46% de identidad con Nilaparvata lugens, 50.42% con Triatoma infestans, 43.18% con Plautia stali Vg1, 43.61% con Plautia stali Vg2, 46.78% con Plautia stali Vg3, 45.88% con Graptrosaltria nigrofuscata, 48.29% con Riptortus clavatus, 48.17% con Lethocerus deyrollei, y 56.06% con Cimex lectularius. Este estudio tiene como objetivo detectar genes involucrados en el desarrollo y la reproducción del insecto vector, potencialmente targets para silenciamiento mediante ARNi y de esta manera aportar estrategias alternativas de control.