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Prefacio La explotación intensiva del suelo de la agricultura convencional (de alto insumo) de las últimas décadas en Argentina, con permanente extracción de nutrientes, está afectando su fertilidad natural y diversidad microbiana lo que podría poner en peligro su productividad y sostenibilidad. La aplicación excesiva de fertilizantes y de pesticidas afecta negativamente la actividad de poblaciones microbianas edáficas que pueden contribuir a reducir el uso de agroquímicos y fertilizantes sintéticos. Sin embargo, estos aspectos no siempre son considerados al planificar emprendimientos productivos. Varios grupos microbianos están siendo centro de estudio y manipulación por ser considerados promotores de crecimiento vegetal (PGPM del inglés Plant Growth Promoting Microorganism). Entre ellos se destacan los Hongos formadores de Micorrizas Arbusculares (HMA), quienes colonizan internamente las raíces de las plantas hospedadoras y son reconocidos por incrementar la nutrición vegetal, la capacidad de recuperación de las plantas frente a estrés tanto biótico como abiótico, y por incrementar la estabilidad de los agregados y la biodiversidad edáfica. La formación de micorrizas, es una de las simbiosis mutualistas más extendida en la naturaleza. Por ser los HMA simbiontes obligados, las tecnologías de estudio y manipulación son diferentes al de los restantes microorganismos PGPM. Otro grupo con potencialidad para la formulación de bioinoculantes lo constituyen los hongos del género Trichoderma quienes son reconocidos como agentes de control biológico contra hongos patógenos, solubilizadores de P y productores de factores de promoción del crecimiento vegetal. El entendimiento y conocimiento de la manipulación de microorganismos claves en el ciclado de nutrientes y transferencia a las plantas tales como los HMA, que además contribuyen a la estabilidad y calidad del suelo resulta estratégico. Asimismo, el conocimiento de microorganismos también considerados PGPM tales como hongos del género Trichoderma, amplía el marco conceptual de las potencialidades de la microbiota edáfica para la promoción sustentable del crecimiento vegetal. El propósito de este Manual de Protocolos es aportar los fundamentos básicos para promover el entendimiento, reconocimiento, caracterización y cuantificación de la colonización por HMA en raíces, así como hongos del género Trichoderma nativos del suelo. En la primera sección se describen los fundamentos básicos a seguir para la colecta de muestras de suelo y la manipulación del material a ser analizado, así como para el aislamiento y multiplicación de HMA y Trichoderma. En la segunda sección se describen las principales técnicas destinadas a cuantificar la colonización por HMA en raíces, así como la presencia de HMA, Trichoderma y microorganismos cultivables en muestras de suelo. También se detalla la cuantificación de la glomalina, una proteína asociada a la actividad HMA. En la tercera sección se describen los lineamientos básicos para estudios experimentales en laboratorio y a campo con HMA y Trichoderma. En la última sección se describen los fundamentos y alcances de algunas técnicas moleculares destinadas a la determinación e identificación de los microorganismos motivo de este Manual. A partir de un compilado de técnicas utilizadas en los principales laboratorios especializados en la temática, nos proponemos brindar las herramientas básicas sobre su reconocimiento y manipulación. La información aportada en este Manual de Protocolos puede facilitar tanto el estudio básico de estos microorganismos, como para potenciales aplicaciones como biofertilizantes. Para finalizar, agradecemos al Ing. Hernán E. Echeverría (INTA-FCA UNMdP) quien realizó la lectura crítica de este Manual y que, con sus comentarios, permitió mejorar la versión final del mismo. Fernanda Covacevich y Verónica Fabiana Consolo Editoras