Producción de penicilia acilasas de aislamientos del género Penicillium obtenidos de suelos de las Argentina

SILVESTRO LB; MURRAY AP; STENGLEIN SA; ARROYO M; ACEBAL C; VELASCO BUCHELI R; DE LA MATA I; MORENO MV

CABA

Conferencia; III Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2015

AAM

Penicillium sp. es un género cosmopolita cuyas especies son capaces de desarrollarse sobre diversos tipos de sustratos. Desde el punto de vista biotecnológico ha sido de interés, ya que son capaces de sintetizar antibióticos o precursores de los mismos y una amplia gama de enzimas hidrolíticas, tales como proteasas, lipasas, celulasas y acilasas. Las Penicilina acilasas están involucradas en la conversión de penicilinas a ácido 6-aminopenicilánico (6-APA) y penicilinas semisintéticas, por tal razón resulta relevante el hallazgo de nuevas enzimas con mayor poder catalitico. El objetivo fue evaluar la producción de enzimas Penicil acilasas de aislamientos del género Penicillium obtenidas de suelos de Argentina. Para ello, se partió de una colección de 50 aislamientos, las especies empleadas fueron Penicillium aethiopicum (3)Penicillium griseofulvum (5), Penicillium kananaskense (1) Penicillium lilacinum(4), Penicillium Paraherquei (3), Penicillium pinophilus (Talaromyces pinophilus) (10), Penicillium meridianum (4), Penicillium purpurogenus (Talaromyces purpurogenus)(18), Talaromyces sayulitensis(2). Cada aislamiento se colocó a crecer en placas de Petri con agar extracto de malta. Se incubaron durante 2 semanas en estufa de cultivo a 21+2°C con alternancia de luz/oscuridad 12hs. Para la obtención de la suspensión de esporas, a cada placa de Petri se le adicionaron 15 ml de solución estéril de Tween 80®, se raspó el micelio con bisturí previamente flameado y se filtró a través de una gasa estéril. Posteriormente 4 x 104 esporas se pusieron a crecer por duplicado en erlenmeyers de 250 ml con 50 ml de medio líquido durante 3 días en agitador orbital a 28 ºC 1 180 rpm.  El sobrenadante enzimático obtenido fue empleado para el ensayo espectofotométrico de actividad penicil acilasa empleando como sustratos Penicilina V y Penicilina G y la posterior cuantificación del 6-APA (producto de la reacción) mediante p-dimetilaminobenzaldehído. Del total de los aislamientos evaluados se observó que las especies que reflejaron actividad Penicillina V acilasas (expresado como U(µmol/ml)), fueron: P. aethiopicum (2), P. griseofulvum(2), P. meridianum(1) P. Paraherquei (2), P. pinophilus (1) y  P. purpurogenus (8) y con respecto a la actividad  Penicillina G acilasas las especies fueron P. aethiopicum (1), P. griseofulvum(1), P. meridianum(3), Penicillium pinophilus (2) y  P. purpurogenus (5). Los mayores valores para penicilina G acilasa lo muestran P. paraherquei y Penicillium purpurogenus y para Penicilina V acilasa: P. aethiopicum, P. griseofulvum y P. meridianum. Las especies mencionadas reflejan buenas perpectivas para ser empleadas en la hidrólisis de penicilinas y la producción de antibióticos semisintéticos, siendo significativa la importancia que reside en el empleo de especies frecuentes en suelos de Argentina para tal fin.