EFECTO DE N-ACETILCISTEÍNA E IDEBENONA DURANTE LA INCUBACIÓN EN ANAEROBIOSIS DE LEVADURAS

CHAPELA PABLO, MANCINI MILAGROS, BURGOS ISABEL, ALONSO MANUEL & STELLA CARLOS

Rosario

Congreso; 7ºmo Expo Congreso Bioquímico; 2014

Colegio de Bioquímicos de Santa Fe

  Efecto de N-acetilcisteína e Idebenona durante la incubación en anaerobiosis de levaduras. S. P. Chapela1,2, H. I. Burgos2, M. Alonso2-3, C. A. Stella2 1,2Hospital Británico, 2INBIOMED Universidad de Buenos Aires-Conicet, 3Departamento de Ciencias Biológicas, Ciclo Básico Común, Universidad de Buenos Aires. cstella@fmed.uba.ar Existen circunstancias, tanto fisiológicas como patológicas, en que las células son sometidas a la ausencia o la disminución del aporte de oxígeno. Estas situaciones tienen lugar durante apneas de sueño, fallas cardiovasculares, episodios de sepsis y procedimientos quirúrgicos. La disminución puede ser transitoria o extenderse por periodos extensos que comprometen la funcionalidad de la célula. La subsiguiente reoxigenación puede sobrepasar la capacidad de la célula para metabolizar el oxígeno recibido; y, como consecuencia, el poder oxidante o de formación de radicales libres de esta molécula conduce a alteraciones en el funcionamiento y estructura celulares. En nuestro laboratorio, hemos utilizado la levadura Saccharomyces cerevisiae como sistema modelo para el estudio de diversos procesos celulares que involucran el metabolismo mitocondrial y las consecuencias del problema descripto. Las células de este microorganismo tienen la capacidad de crecer tanto en condiciones de anaerobiosis como de aerobiosis. El crecimiento o pasaje de una condición a otra implica la inducción o activación de distintos genes. El objetivo del presente trabajo consiste en: a) evaluar la viabilidad celular en condiciones de ausencia-presencia de oxígeno, b) relacionar la viabilidad observada con la formación de radicales libres y potencial de membrana mitocondrial, y c) ensayar drogas de acción mitocondrial o de poder reductor en ciclos de ausencia-presencia de oxígeno. Para ello, se incubaron células de levadura a 30ºC, durante 48 horas, usando una jarra de anaerobiosis y un sistema de generación de OXOID. Al término de esta incubación, las células fueron transferidas a condiciones aeróbicas durante 48 horas a la misma temperatura. Como control, se mantuvieron células en aerobiosis durante todo el experimento. La incubación, tanto en condiciones de anaerobiosis como de aerobiosis, se efectuó en presencia de N-Acetilcisteína (NAC) o de idebenona, dos agentes conocidos por su capacidad antioxidante. Una vez concluida la incubación en las distintas condiciones de oxigenación, se efectuó la medición de radicales libres mediante fluorescencia del 2,7-diclorofluorescein-diacetato, y la medición del potencial de membrana mediante rodamina 123. Los valores de fluorescencia relativa entre las células tratadas con los mencionados agentes antioxidantes y las células sin tratamiento  muestran que la NAC disminuye tanto el potencial de membrana mitocondrial en anaerobiosis, como la producción de radicales libres en aerobiosis. En cambio, la idebenona, aumenta el potencial de membrana en anaerobiosis, pero no tiene efecto protector al restituirse el suministro de oxígeno. Estos resultados permiten inferir que la NAC resultaría más ventajosa como protector antioxidante bajo cualquier condición de suministro de oxígeno. En cambio, la idebenona, dado que aumenta el potencial de membrana mitocondrial durante la anaerobiosis, podría resultar adecuada para mejorar el funcionamiento de la mitocondria en condiciones de bajo suministro de oxígeno o de deficiencia en el funcionamiento del orgánulo.   Código de inscripción: AE9F70