Activacion transcripcional del gen de la MAP quinasa fosfatasa-1 (MKP-1) y del marcador de estres de reticulo endoplasmico GRP78 en celulas de tubulo proximal renal de zarigueya (OK) expuestas a albumina

GOROSTIZAGA, A.; GOMEZ, N.; ACQUIER, A.; MORI SEQUEIROS GARCIA, M.; BEKIER, F.; MENDEZ, C.F.; PAZ, C.

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La sobrecarga de albúmina produce estrés de retículo endoplásmico (ER) y desencadena la activación de las MAPK quinasas (MAPKs) ERK1/2, JNK y p38. Las MAPK fosfatasas (MKPs) son enzimas que inactivan a las MAPKs e inducibles por los mismos estímulos que activan las MAPKs. MKP-1 se localiza mayormente en el núcleo y desfosforila a todas las MAPKs. Previamente describimos que en células de túbulo proximal renal de zarigüeya (OK), la exposición a albúmina sérica bovina (BSA) incrementa transitoriamente los niveles de ERK1/2 fosforilada y de MKP-1. Nuestro objetivo fue avanzar en la caracterización molecular y funcional de MKP-1 en células OK expuestas a BSA (20 mg/ml). Dado que no se conoce la secuencia del genoma de zarigüeya (Didelphis virginiana), utilizamos la secuencia de MKP-1 de una especie altamente emparentada (Monodelphis sp) para el diseño de oligonuclétidos que se usaron en ensayos de RT-PCR usando como templado ARN de células OK. El fragmento de ADNc aisladoresultó ser 98% homólogo a MKP-1 de Monodelphis sp. En base a esta secuencia se diseñaron oligonucleótidos para evaluar el efecto de la BSA sobre los niveles del ARNm de MKP-1, por RT-PCR semicuantitativa. La BSA incrementó en forma transitoria los niveles del ARNm (2 veces vs. control luego de 1h). Dado que ActD bloqueó este efecto, se deduce que la BSA activa la transcripción de MKP-1. Este efecto contribuiría al aumento de MKP-1 previamente detectado por Western blot, y particularmente en el núcleo como demostramos aquí por inmunocitoquímica. La BSA aumentó el ARNm correspondiente a GRP78, proteína marcadora de ER y un inhibidor de la activación de ERK1/2 (PD98059, 50 μM) evitó este efecto. En conjunto nuestros datos indican que MKP-1 es inducida por BSA no solo a nivel post-traduccional como ya demostramos, sino también a nivel transcripcional, y sugieren que podría contribuir al “apagado” de aquellos eventos dependientes de ERK1/2 que sondisparados por BSA, como la inducción de GRP78.