REGULACION DE LA EXPRESIÓN DE LA MAP QUINASA FOSFATASA-2 (MKP-2) Y SU PARTICIPACION EN LA EXPRESIÓN DE GENES DEPENDIENTES DE ERK1/2

NATALIA V GOMEZ; ALEJANDRA B GOROSTIZAGA; SILVIA GONZALEZ- CALVAR; MM MORI SEQUEIROS GARCÍA; CRISTINA PAZ

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Cientifica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Las MAP quinasas fosfatasas (MKPs) son enzimas que in vivo desfosforilan específicamente a las MAP quinasas, como ERK1/2. Las isoformas MKP-2 y MKP-1 se inducen por diferentes estímulos, aunque MKP-2 exhibe una cinética de inducción más lenta. Por su localización nuclear, ambas son potenciales reguladores de la expresión de genes dependientes de MAP quinasas. Encélulas de Leydig MA-10, la estimulación del receptor de LH con gonadotrofina coriónica humana (hCG) promueve la inducción de MKP-1, evento que provoca la inactivación temprana de ERK1/2 y el cese de la acción hormonal aguda sobre la expresión génica dependiente de estas quinasas. Nuestro objetivo fue analizar la expresión de MKP-2 en células de Leydig MA-10 estimuladas con hCG y su impacto en el curso temporal de la actividad de ERK1/2 y en la expresión del gen CYP11A1, gen que se induce luego de varias horas de estimulación por LH vía ERK1/2. Se evaluaron los niveles del ARNm de MKP-2 por qPCR y se determinó que hCG activa la transcripción del gen. Mediante la expresión transitoria de la quimera flag-MKP-2, y análisis de los niveles de la misma por Western blot con un anticuerpo anti-flag, determinamos quehCG promueve la acumulación de la quimera y su traslocación al núcleo. El análisis por Western blot de los niveles de fosfo-ERK1/2 en células que expresan un ARN de interferencia para MKP-2 (shARN-MKP-2), mostró que esta fosfatasa completa la inactivación ERK1/2 iniciada por MKP-1. Además, la expresión del shARN-MKP-2 incrementó el efecto del 8Br-AMPc sobre la actividad del promotor y sobre los niveles del ARNm correspondiente a CYP11A1, evidenciando la participación de MKP-2 en la regulación por LH/hCG de la expresión génica tardía. Nuestros resultados son consistentes con un modelo en el que genes de diferente cinética de inducción requieren la actividad de ERK1/2 en diferente marco temporal, lo que implica una acción diferencial de MKP-1 y MKP-2 en la regulación de la expresión génica.