Identificacion bioquimica y molecular de aislamientos de Nocardia spp.

JORDA VARGAS L.; TUTZER S.; TRAGLIA G.; ISOLA M.M.; BONNEAU B.; RAMIREZ M.S.; KAUFMAN S.

Buenos Aires

Congreso; VII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas – SADEBAC; 2012

SADEBAC- Asociación Argentina de Microbiología

Nocardia spp es un patógeno oportunista con alta heterogeneidad dentro del género y con posibilidades de seguir evolucionando en su adaptación al medio ambiente involucrando constantes cambios taxonómicos en los últimos años. Aunque han sido descriptas más de 50 especies sólo 16 se han asociado con infecciones humanas. La epidemiología y la sensibilidad a los antimicrobianos es muy variable. Esto influye en las políticas de instauración de terapias empíricas y hasta la fecha no existen consensos nacionales de terapias antimicrobianas para este tipo de infecciones porque no hay registros de la epidemiología local ya que Nocardia spp. tiene baja frecuencia de aislamiento en la mayoría de los hospitales. La identificación requiere numerosas pruebas bioquímicas y no siempre se puede acceder a nivel de especie con certeza. El objetivo de este trabajo es realizar la genotipificación de aislamientos de Nocardia spp. aisladas en un Hospital de la CABA. Se realizaron pruebas bioquímicas como micelio aéreo, aminoácidos (xantina, caseína, hipoxantina, tyrosina), azúcares, α glucosidasa, γ ɤ glucosaidasa, α manosidasa, gelatina, nitrato, esculina, citrato, discos de antibióticos (amikacina, eritromicina, tobramicina, ciprofloxacina y gentamicina), PYR de 4 hs. etc. Para la identificación molecular se realizó extracción de ADN por método boiling y posterior amplificación del 16s rRNA utilizando la reacción de PCR con cebadores universales (cebadores 16sR ACGGCTACCTTGTTACGA y 16sF AGAGTTTGATCATGGCTC). Los amplicones fueron secuenciados en ambas cadenas. El análisis de las secuencias fue realizado utilizando los softwares Sequencher 4.7 (Gene Codes Corp.) y BLAST versión 2.0 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). Se obtuvieron 69 aislamientos compatibles bioquímicamente con Nocardia spp. recuperados entre el año 2000 al 2011 de muestras respiratorias (37) piel y partes blandas (19), hemocultivos (5) y otros (3 ganglio, 2 de LCR, 2 l. pleural y 1 l. peritoneal). De estos aislamientos 14 fueron secuenciados obteniéndose concordancia a nivel de especie en 3 casos (2 N farcínica y 1 N. otitidiscaviarum). Una cepa de N. puris y 1 N. cyriacigeorgica fueron informadas como N. farcínica, mientras que el resto (n=6) sólo se pudieron informar bioquímicamente como Nocardia spp (2 N. cyriacigeorgica, 1 N. asiática, 1 N. abscesus, 2 Nocardia spp). Dos aislamientos que fueron informados como N. brasiliensis fueron genotipificadas como Nocardiopsis dassonvillei y Gordonia sputi respectivamente y una Nocardia spp como Actinomadura nitritigenes. Los métodos moleculares son importantes para conocer la epidemiología de los microorganismos de difícil identificación fenotípica y pueden ser útiles para optimizar la identificación mediante pruebas bioquímicas.