RESPUESTA ANTIVIRAL DE INTERFERÓN EN CÉLULAS HEK293 PERSISTENTEMENTE INFECTADAS CON EL ARENAVIRUS JUNÍN

ARMIENTO, MARÍA NIEVES; SCOLARO, LUIS A.

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología; 2019

AAM

Introducción y Objetivos: Los interferones (IFNs) son una familia de citoquinas que juegan un papel clave en la respuesta inmune como potentes agentes antivirales. Suprimen la replicación del virus de forma directa e indirecta por inducción y regulación de la activación de células involucradas en la respuesta inmune innata y adaptativa. La ARN helicasa RIG-I es uno de los receptores celulares capaces de reconocer y unirse a los ácidos nucleicos virales, lo cual desencadena una cascada de señalización que lleva a la activación de factores de transcripción como los de la familia del factor regulador del interferón (IRF) (se fosforilan y traslocan al núcleo), un proceso que resulta en la síntesis de interferón de tipo I (IFN-I). Los virus pertenecientes a la familia Arenaviridae son capaces de manipular el sistema inmune de sus hospedadores, lo que les permite establecer infecciones persistentes que les posibilitan perpetuarse en la naturaleza. Asimismo, in vitro desarrollan con facilidad infecciones persistentes en los cultivos que infectan. El objetivo de este trabajo es caracterizar la respuesta antiviral de IFN en células HEK293 (riñón fetal humano) persistentemente infectadas con el arenavirus Junín (JUNV).Materiales y Métodos: La producción de IFN en cultivos persistentemente infectados se indujo por sobreinfección con JUNV o infección con virus dengue serotipo 2 (DENV-2), y por tratamiento con Poly I:C (análogo sintético de ARN doble cadena). El efecto de la inducción de IFN en la expresión de RIG-I y la activación de IRF-3 se analizó a través de un ensayo de western blot e inmunofluorescencia indirecta.Resultados: En estudios previos se reportó que las células HEK293 persistentemente infectadas con JUNV (denominadas 2933) sólo produjeron bajos niveles de IFN en el inicio de la etapa persistente. Resultaron refractarias a la sobreinfección con JUNV sin producir IFN, mientras que al utilizar DENV-2 como inductor, las células 2933 produjeron IFN con títulos similares a los obtenidos en las células 293 infectadas con el mismo virus. Por otro lado, las células 2933 resultaron protegidas frente al desafío con el virus de la estomatitis vesicular (VSV) cuando se trataron con IFN beta comercial pero no así con Poly I:C. En este trabajo se demuestra que las células 2933 tratadas con Poly I:C generan una mayor expresión de RIG-I en comparación con las mismas células sin tratar. Con respecto a la activación de IRF-3, las células 2933 presentan una mayor traslocación de dicho factor de citoplasma a núcleo en comparación con las mismas células sin infectar, lo cual indicaría que durante la etapa de persistencia viral, una mayor proporción de IRF-3 se encontraría traslocado en el núcleo. No obstante, dicha traslocación no se incrementa con un tratamiento con Poly I:C o una sobreinfección/infección con JUNV o DENV-2.Conclusiones: En las células HEK293 persistentemente infectadas con JUNV la traslocación de IRF-3 no es una condición suficiente para inducir el estado antiviral mediado por la síntesis de IFN.