Hemo oxigenasa-1 se expresa en células madre embrionarias y aumenta sus niveles de ARNm y proteína durante la diferenciación

CAMILA VAZQUEZ ECHEGARAY; ELBA VAZQUEZ; AYELEN TORO; MARCOS FRANCIA; VICTORIA PETRONE; SOLEDAD COSENTINO; ALEJANDRA GUBERMAN

CABA

Jornada; Jornadas Interdisciplinarias de Química Biológica; 2017

Las células madre embrionarias (CME) poseen dos propiedades fundamentales:son células pluripotentes, lo cual implica que tienen la habilidad de diferenciarse a tipos celulares de las tres capas germinales, y además tienen la capacidad de autorrenovarse, dando lugar a células hijas de iguales características. Además, poseen varios mecanismos que aseguran la estabilidad de su genoma, evitando de esa manera la propagación de daño al ADN. Hemo oxigenasa (HO) es la enzima limitante en el catabolismo oxidativo del grupo hemo y, en particular, HO1, su forma inducible, es conocida por su actividad antioxidante y antiapoptótica. Si bien se ha estudiado la acción de HO-1 en células madre multipotentes, aún se sabe poco del rol de HO-1 en células madre pluripotentes. Nuestro objetivo es estudiar si HO-1 está involucrada en la supervivencia de las CME y/o en el mantenimiento de la pluripotencia. Para dicho fin, primero diferenciamos CME de la línea W4 con un protocolo de diferenciación no dirigido, cultivando las células en ausencia de la citoquina LIF durante 4 días. Extrajimos ARN y proteínas de células indiferenciadas, tomándolas como control, y a distintos tiempos durante el protocolo de diferenciación (día 1, día 2, día 3 y día 4). Analizamos el perfil de expresión de HO-1 mediante RT-qPCR y Western Blot. Comprobamos que tanto los niveles de ARN mensajero como los de proteína aumentaban durante la diferenciación. Además, mediante inmunofluorescencia estudiamos la localización subcelular de la proteína HO-1 a lo largo del proceso de diferenciación. Observamos que es expresada tanto en el citoplasma como en el núcleo, en el estado indiferenciado, mientras que durante la diferenciación, sus niveles aumentan, junto con la disminución de Oct4 y Nanog, dos factores detranscripción fundamentales en el mantenimiento de la pluripotencia. Losresultados obtenidos por RT-qPCR y por WB, fueron analizados usando unANOVA de bloques aleatorios y posterior Test de Tukey. Nuestros resultadosmuestran que la expresión de HO-1 es modulada a lo largo de la diferenciación, lo cual sugiere que esta enzima podría ser relevante para dejar el estadoindiferenciado o durante el proceso de diferenciación, pudiendo estar asociadacon la regulación de Oct4 y Nanog.