Interacciones de la proteína viperina con proteínas virales del Mammarenavirus Junín, como posibles mecanismos de restricción de la infección

PEÑA JOSÉ, CORDO SANDRA, GARCÍA CYBELE

CABA

Congreso; XII Congreso Argentino de Virologia; 2017

Sociedad Argentina de Virología

Viperina (VIP) ha sido descripta en los últimos años como una proteína con importante función antiviral. Los niveles de expresión de VIP son generalmente bajos, sin embargo, su expresión es fuertemente inducida por IFN tipo I, un amplio rango de virus, lipopolisacáridos y poli (I:C)1. La estructura de viperina presenta tres dominios diferentes1, 2. Nuestro objetivo, es la caracterización de VIP como factor de restricción en la infección con el Mammarenavirus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina. En el presente trabajo se evaluó el rol de VIP durante la infección con JUNV en la línea celular humana A549 y las interacciones entre VIP y la nucleoproteína (N) viral. En primer lugar, estudiamos la actividad antiviral de VIP al sobreexpresar esta proteína en cultivos infectados con JUNV. Nuestros resultados demostraron que esta proteína ejerce una actividad antiviral a las 48 hs post transfección. Para explorar el mecanismo de esta actividad antiviral nos enfocamos en las posibles interacciones entre N y VIP. En primer lugar se realizó una evaluación in silico, utilizando herramientas y programas bioinformáticos para el acoplamiento e interacción de proteínas. Luego, se analizó por inmunofluorescencia la expresión de VIP y N en células que fueron co-transfectadas con plásmidos que codifican para ambas proteínas, observándose que ambas proteínas colocalizan a nivel subcelular. Finalmente, estos resultados fueron confirmados a través de estudios de co-inmunoprecipitación de proteínas, que revelaron interacción. Para estudiar el posible mecanismo de acción de VIP sobre la función de N en la transcripción del genoma viral se evaluaron por qRT-PCR los niveles relativos del transcripto viral. Se observó una disminución en la expresión del mRNA de N en células que sobreexpresan VIP respecto al control viral.