HOMOCISTEINA-TIOLACTONA ALTERA EL EFECTO DE PROTEÍNAS DEL SUERO EN CULTIVOS DE CÉLULAS ENDOTELIALES

VITTORI DANIELA; MALTANERI ROMINA EUGENIA; NESSE, ALCIRA; SCHIAPPACASSE AGUSTINA; GENOUD VALERIA; CHAMORRO MARÍA EUGENIA

Jornada; Jornadas Interdisciplinarias de Quimica Biologica; 2017

La homocisteína es considerada un factor de riesgo deenfermedad cardiovascular, ya que el aumento de sus niveles(hiperhomocisteinemia, HHcy) está asociado a disfunción endotelial involucradaen el desarrollo de trombosis y ateroesclerosis. Se ha propuesto a lahomocisteína-tiolactona (HTL), especie altamente reactiva que induce N-homocisteinilación de proteínas porunión a residuos lisina, como responsable de la acción perjudicial de la HHcy.Se estudió si los estímulos proangiogénicos que generan,tanto el suero como albúmina y eritropoyetina, en el cultivo de célulasendoteliales son modificados cuando las proteínas son N-homocisteiniladas.El tratamiento consistió en incubación con HTL por 24 h a37 °C. La modificación estructural de las proteínas fue analizada porelectroforesis capilar, electroforesis en gel de poliacrilamida ycuantificación de grupos sulfhidrilos libres (reacción de Ellman). Se evaluó lamigración celular por scratching, lainvasión celular con transwells y laformación de túbulos in vitro con matrigel en cultivos de célulasendoteliales EA.hy926.Se corroboró lareacción de N-homocisteinilación porel aumento de grupos sulfhidrilos y el cambio de la carga neta de las proteínasen electroforesis. En presencia del Suero-HTL la migración celulardisminuyó significativamente en forma dependiente de la concentración de HTL,se impidió la invasión y laformación de túbulos con respecto a losensayos en presencia de suero sin tratar. El tratamiento con HTL de la albúmina,la proteína más abundante en el suero, anuló su efecto promigratorio. Por laimportancia farmacológica de la eritropoyetina recombinante, se estudió elefecto de HTL sobre la proteína en unambiente proinflamatorio, observándose disminución significativa de su efecto promigratorioen presencia de TNF-α. Los resultados muestran que la N-homocisteinilación de las proteínasdel suero altera su efecto proangiogénico. La modificación estructural defactores de crecimiento por HTL afectaría sus funciones fisiológicas yfarmacológicas.