HOMOCISTEINA-TIOLACTONA ALTERA EL EFECTO DE LAS PROTEÍNAS DEL SUERO EN CULTIVOS DE CÉLULAS ENDOTELIALES

MALTANERI R; VITTORI D; CHAMORRO ME; SCHIAPPACASSE A; GENOUD V; NESSE A

Montevideo

Congreso; XIV Congreso Uruguayo de Hematología; 2016

Sociedad Uruguaya de Hematología

Introducción:La hiperhomocisteinemia (HHcy) está asociada a la disfunción endotelialinvolucrada en el desarrollo de trombosis y ateroesclerosis. Se ha propuesto ala homocisteína-tiolactona (HTL), especie altamente reactiva que induceN-homocisteinilación de proteínas por unión a residuos lisina, como responsablede la acción perjudicial de HHcy.Objetivo:Estudiar si el estímulo del crecimiento y migración que genera el suero en elcultivo de células endoteliales es alterado cuando las proteínas del suero son tratadascon HTL. Métodos:El suero fetal bovino (S) fue incubado con HTL (2, 4 y 10 mM; 18 h, 37 °C) (S-HTL).La modificación en la estructura de las proteínas fue analizada porelectroforesis capilar, electroforesis en gel de poliacrilamida y cuantificaciónde grupos sulfhidrilos libres (reacción de Ellman). Se evaluó la migración celularpor scratching, la invasión celular contranswells y la formación de túbulos in vitro con matrigel en cultivos de células endoteliales EA.hy926 y HMEC. Resultados:Se corroboró la reacción de N-homocisteinilación por modificación de la carganeta de las proteínas y aumento de grupos sulfhidrilos. En presencia del S-HTLla migración celular disminuyó, en forma dependiente de la concentración de HTLy se impidió la invasión yformación de túbulos observado enpresencia de suero sin tratar (S). Se estudió el efecto de HTL sobre albúmina(A) y fibronectina (FN), dos proteínas muy abundantes en S que incrementan la migración celular.Se demostró la alteración estructuralde ambas proteínas por HTL lo que generó la disminución de su efecto promigratorio.Los resultados entre S y S-HTL, así como entre albúmina y fibronectina modificadaso no por HTL fueron significativamente diferentes. Conclusión:LaN-homocisteinilación altera el efecto promigratorio del suero en célulasendoteliales, sugiriendo un posible mecanismo de acciónantiangiogénica. La modificación de albúmina y fibronectina estáinvolucrada en dicha acción.