Efecto de la presencia de glucosa y metales sobre la biodegradación de diesel en Pseudomonas extremaustralis: evidencia de cambios fisiológicos en las membranas

RAIGER IUSTMAN, L.J.; LIZARRAGA, L.; COLONELLA, A.; ROSSI, L.; LÓPEZ, N.I.

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología (ALAM); 2016

Pseudomonas extremaustralis es una bacteria aislada de una charca estacional de la Antártida, y ha sido estudiada debido a su capacidad de producir polihidroxialcanoatos de cadena media y de cadena corta, asociado a una alta resistencia a diferentes tipos de estrés.Trabajos previos de nuestro grupo de investigación, demostraron que P. extremaustralis es capaz de degradar hidrocarburos alifáticos de cadena larga (C14 a C22) en condiciones de crecimiento en biofilms y últimamente se ha demostrado que es capaz de hacerlo en condiciones plantónicas pero únicamente en microaerobiosis. En esta condición, al cabo de 7 días de incubación a 28°C, la degradación total del diesel medida por cromatografía gaseosa fue de 16% cuando se utilizó este hidrocarburo como única fuente de carbono. Al analizar si el agregado de un co-sustrato como la glucosa y la presencia de metales como cobre en el medio de cultivo afectaría la degradación de diesel, se observó que en presencia de glucosa como co sustrato (Medio mínimo E2 con 1% v/v diesel y 0.05% m/v de glucosa) se obtenían valores similares a los observados en cultivos con diesel como única fuente de carbono. Por otro lado, el agregado de cobre en concentración sub-letal (E2 con 1% v/v diesel y 0.1mM CuSO4) disminuyó la capacidad de degradar diesel a un 8.5%. Sin embargo, cuando se combinaron los dos factores (E2 con 1% v/v diesel y 0.05% m/v de glucosa, 0.1mM CuSO4) se obtuvo una degradación significativamente mayor (26%).Para estudiar si el efecto observado se debía a una diferencia fisiológica en las membranas de P. extremaustralis, se analizó su capacidad de adhesión a hidrocarburos por el método de MATH (microbial attachment to hydrocarbon). Para ello se cosecharon las células de cultivos de 7 días de crecimiento en los medios se seleccionados, se ajustó a OD600=1 y enfrentó a diesel como hidrocarburo de ensayo. Observamos que las células crecidas en presencia de diesel, glucosa y cobre presentaron un mayor índice de adherencia a hidrocarburos (25%) que aquellas crecidas en presencia de diesel o glucosa únicamente (10% y 12% respectivamente).A su vez, las células cultivadas en los diferentes medios fueron analizadas por medio de un microscopio de fuerza atómica (AFM). Se observó que las células crecidas en presencia de diesel, ya sea con o sin el agregado de glucosa o cobre poseen una estructura bacilar de 2-3 um de largo y 1 um de ancho y no se observaron diferencias estructurales marcadas.Nuestros resultados indicarían que la mayor adherencia a hidrocarburos hallada en las células crecidas en presencia de glucosa y cobre podría explicar la mayor degradación de diesel obtenida en presencia de esos compuestos.