Inhibición in vitro de las actividades de B-esterasas por metilazinfos-oxón y clorpirifos-oxón en machos y hembras de un pez de agua dulce: Cnesterodon decemmaculatus

DE DIEGO, F.; KRISTOFF, G.; BRIGNOLE, T.,; MALLO, A; CACCIATORE, L. C.

Córdoba

Congreso; VI Congreso SETAC Capítulo Argentino; 2016

SETAC Argentina

Cnesterodon decemmaculatus es un poecílido nativo con un marcado dimorfismo sexual. Esta especie ha sido recomendada como organismo bioindicador en estudios de toxicidad. Los objetivos del trabajo fueron: a. Determinar la CI50 en homogenatos de machos y hembras adultos de las actividades colinesterasa (ChE) y de carboxilesterasas (CES) con los sustratos acetiltiocolina (1,5 mM) y p-nitrofenilacetato (1 mM), respectivamente, frente a concentraciones crecientes de los insecticidas organofosforados (OPs) metilazinfos-oxón (MAZ-oxón) y clorpirifos-oxón (CLP-oxón); b. Estudiar el patrón de isoenzimas mediante electroforesis (PAGE nativo) y revelado por actividad con una mezcla de los sustratos 1 y 2-naftilacetato y evaluar el efecto de concentraciones crecientes de ambos oxones sobre las CES. Los resultados mostraron que la actividad ChE in vitro es un orden de magnitud más sensible al MAZ-oxón (CI50 = 3,26 x 10-8 M y 2,76 x 10-8 M, en machos y hembras respectivamente) que al CLP-oxón (CI50 = 3,06 x 10-7 M y 1,73 x 10-7 M, en machos y hembras respectivamente). El MAZ-oxón fue un pobre inhibidor de de CES, siendo las relaciones molares (CI50 CES/CI50 ChE) de 141 y 100 en machos y hembras, respectivamente; el CLP-oxón presentó CI50 similares tanto para la inhibición de las actividades ChE como de CES en ambos sexos. Los geles revelados por actividad de CES mostraron siete bandas (numeradas de ánodo a cátodo como CES1 a CES7) evidenciando la presencia de distintas isoenzimas, las cuales no se inhibieron por preincubación con 0,5 mM de eserina (inhibidor específico de ChE). Las mayores actividades hidrolíticas se observaron en CES4 y en CES6 y CES7. CES5 resutó ser una banda intensa en hembras y muy tenue en machos. La preincubación de los homogenatos con concentraciones 1 µM de CLP-oxón o de MAZ-oxón mostraron con el primer pesticida una inhibición prácticamente total de todas las isoenzimas con relación a los controles, mientras que con el segundo OP no se observó inhibición de las isoenzimas. Estos resultados muestran que las actividades de ChE y de CES en C. demmaculatus presentan diferente sensibilidad según el pesticida usado, siendo menor las diferencias observadas según el sexo considerado. El monitoreo combinado de ambas actividades enzimáticas utilizando diferentes sustratos, junto con el patrón de inhibición de isoenzimas, proveen una indicación más útil como parámetro biomarcador de exposición a los OPs que la determinación única de la actividad ChE