Regulación transcripcional de la acetiltransferasa de histonas Myst4 por los factores de transcripción esenciales en células madre pluripotentes

MARÍA SOLEDAD COSENTINO; CLAUDIA SOLARI; ARIEL WAISMAN; CAMILA VAZQUEZ ECHEGARAY; MARÍA VICTORIA PETRONE; MARCOS FRANCIA; LINO BARAÑAO; ALEJANDRA GUBERMAN

Mar del Plata

Congreso; LX Congreso de la Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas; 2015

Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas

La pluripotencia y autorrenovación, propiedades fundamentales de las células madre (CM) embrionarias (CME), son mantenidas por factores de transcripción (FT) específicos, siendo los más importantes Oct4, Sox2 y Nanog.Con el objetivo de estudiar remodeladores de la cromatina relevantes en CME, analizamos estudios de ChIP a gran escala, seleccionando genes que poseen sitios de unión para dichos FT, y que por lo tanto su expresión podría estar regulada por éstos. En este trabajo estudiamos a Myst4, una acetiltransferasa de histonas que posee un elemento regulatorio altamente ocupado por los mismos. Analizamos la expresión de Myst4 por RT-qPCR, en CME murinas indiferenciadas y en distintos estadios de diferenciación. Encontramos que en los tres protocolos de diferenciación utilizados, Myst4 se reprimió notoriamente. A continuación, para estudiar la regulación en un sistema más definido, disminuimos la expresión de Oct4 y Nanog en CME mediante transfección con shRNAs específicos. La expresión de Myst4 se redujo en las condiciones en que cualquiera de los dos FT fue silenciado parcialmente. Estos resultados indican que Oct4 y/o Nanog podrían estar involucrados en la regulación transcripcional de este gen. Dado que planeamos investigar la participación de Myst4 en procesos que deben ser analizados a largo plazo, utilizamos una estrategia de shRNA inducible mediada por el vector Tet-pLKo. Obtuvimos 4 construcciones con distintas secuencias de shRNA, y sólo una de ellas produjo una alta disminución en el ARNm de Myst4 con respecto al control. Actualmente estamos generando líneas estables de CME con esta construcción y una línea control con el vector vacío. Estudiaremos el efecto del silenciamiento de Myst4 sobre el mantenimiento del estado indiferenciado y sobre la diferenciación. Consideramos que la comprensión de los mecanismos involucrados en la regulación de la estructura de la cromatina en CM pluripotentes es fundamental para su futura aplicación.