Un linker flexible y conservado potencia la afinidad del dominio viral intrínsecamente desordenado AdE1A(36-146) por su blanco Rb

GONZÁLEZ FOUTEL NS; GLAVINA J; SÁNCHEZ IE; DE PRAT GAY G; CHEMES LB

Santiago del Estero

Congreso; XLIV Reunión de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2015

Sociedad Argentina de Biofísica

Virus patogénicos humanos como el Adenovirus, HPV y SV40 poseen proteínas que son capaces de interactuar con el supresor de tumores retinoblastoma (Rb), regulador esencial del ciclo celular, diferenciación y estructura cromatínica en eucariontes. Tales interacciones están mediadas por los mismos sitios principales con los que Rb une sus blancos endógenos: el sitio de unión al factor de transcripción E2F y el motivo  LxCxE. Estos virus hacen mímica de los motivos cortos lineales de interacción usualmente presentes en regiones intrínsecamente desordenadas de su estructura, lo que les permitiría interferir de modo eficiente la red celular y  tomar el control de la célula. La oncoproteina viral E1A del Adenovirus (AdE1A) une a Rb, a través de dos sitios de contacto ubicados en las regiones conservadas ?CR1? (que presenta el motivo interacción lineal E2Fmimic) y ?CR2? (que contiene el motivo LxCxE) y separados por un ?linker? de 70 residuos; siendo ambos necesarios para desplazar a su blanco celular E2F. Dado el escaso conocimiento mecanístico y estructural acerca de este tipo de interacciones, el objetivo de este trabajo es caracterizar en solución a AdE1A (CR1 y CR2) y su interacción con Rb. El fragmento AdE1A36-146 es un monómero extendido y carente de estructura secundaria y terciaria consolidadas en solución. El monómero extendido de AdE1A36-146 sufre una compactación al unirse a RbAB con estequiometría 1:1. Los sitios individuales E1ACR1 (E2F-mimic) y E1ACR2 (LxCxE) unen a RbAB con afinidad y tiempo de vida menores a los del motivo celular E2F-TA.La afinidad de AdE1A36-146 por RbAB es 7000 veces mayor que la de los motivos individuales, y el tiempo de vida del complejo es 3000 veces mayor. La potenciación de la afinidad observada puede ser explicada por un modelo que considera al ?linker? como un polímero flexible. El largo observado en el linker de Ad5 es óptimo para potenciar la unión. Un análisis de 111 secuencias de Adenovirus revela que tanto el largo del linker como propiedades de secuencia se encuentran conservadas evolutivamente.