Diferencias tisulares de B-esterasas en Planorbarius corneus: estudios cinéticos, electroforéticos y de inhibición in vitro

OTERO, S; KRISTOFF, G.

Neuquén

Congreso; V Congreso Argentino Setac Argentina; 2014

SETAC

Los insecticidas organofosforados (OP) tienen como mecanismo de acción la inhibición de las B-esterasas: colinesterasas (ChEs) y carboxilesterasas (CEs). El objetivo de este trabajo fue caracterizar parcialmente las B-esterasas presentes en distintas regiones de Planorbarius corneus y evaluar la respuesta de las isoformas de CEs ante la exposición al OP metilazinfos. Se utilizaron homogenatos del tejido blando total (T), región céfalo-pedal (CP), región pulmonar (P), glándula digestiva (GD) y gónadas (G). En cada región, se calculó km y vmáx, utilizando distintas concentraciones de acetiltiocolina (AcSCh) , butiriltiocolina (BuSCh), propioniltiocolina (PrSCh), p-nitrofenilacetato (p-NFA), p-nitrofenilbutirato (p-NFB) y 1 y 2 naftilacetato (1 y 2-NA). También se determinó la actividad con exceso de sustrato y la inhibición in vitro con eserina (inhibidor específico de ChEs). A través de un PAGE nativo con posterior revelado por actividad de CEs, se evaluó la presencia de distintas isoformas y como respondían a la exposición por 48 h a metilazinfos. La eserina (0,01-1 mM) inhibió un 90% de ChE en todas las regiones. Los mayores valores de Vmáx y Km se obtuvieron con AcSCh y la menor km con PrSCh. En cuanto a los tejidos, los valores de Vmáx resultaron: P>G,CP>GD. El valor de km para los sustratos AcSCh y BuSCh resultó GD>G>P>CP mientras que con PrSCh CP>P,GD>G. ChE se vio inhibida por exceso de AcSCh y PrSCh. En cuanto a CEs, los valores mayores de Vmáx y km fueron obtenidos con p-NFA independientemente del tejido. La región P fue la que presentó mayor Vmáx con p-NFA y p-NFB y la GD con 1 y 2-NA. Se encontraron diversas isoformas de CEs en los tejidos siendo el patrón de bandas similar entre ellos excepto en GD. Los expuestos al OP mostraron menor actividad que el control, sin embargo, no todas las isoformas ni tejidos se inhibieron de igual manera. Concluimos que las B-esterasas de P. corneus presentan diferencias significativas entre las regiones estudiadas.