CAMBIOS EN LAS PROPIEDADES FISICO-QUIMICAS DE LA PROTEINA CALTRIN DE RATA POR CONJUGACION CON SUCCIMIDIL ESTER DE FLUORESCEINA (SEF)

CORONEL CE; SOTTILE AE

Córdoba

Jornada; XXII Jornadas Científicas Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

Laproteína caltrin (calcium transport inhibitor) del plasma seminal de rata sesintetiza y secreta en las vesículas seminales. Durante la eyaculación, caltrinse une a la región acrosomal de la cabeza de los espermatozoides e inhibe lacaptación de Ca2+ extracelular ejerciendo así, el papel modulador del inicio dela exocitosis acrosomal espontánea. La unión específica de caltrin a losespermatozoides de la porción cauda de epidídimo fue revelada inicialmente porinmunofluorescencia indirecta usando anticuerpos anti-caltrin preparados enconejo, y anticuerpos anti-IgG de conejo marcados con isotiocianato de fluoresceína(FITC). A fin de realizar nuevos estudios dirigidos a determinar cuándo y cómoadquieren los espermatozoides la capacidad para unir caltrin, durante lamaduración epididimaria, diseñamos un ensayo simple, sin anticuerpos,utilizando solamente la proteína fluorescente (caltrin*) obtenida porconjugación con SEF. SEF se une covalentemente a los numerosos residuos de Lys presentesen la secuencia de caltrin, lo cual podría modificar algunas propiedadesfísicas y funcionales de la molécula. Probablemente debido a esto, las imágenes de microscopía de fluorescencia de los espermatozoidestratados con caltrin* mostraron marcadas diferencias comparadas con las obtenidaspor IFI. Mientras caltrin nativa se distribuyó a lo largo de la región dorsalde la cabeza de los espermatozoides de la porción cauda, caltrin* se observó en a una porción limitada de la región dorsalde estas mismas células. Asimismo e inesperadamente, caltrin* también sedetectó unida a la región ventral y zona post-ecuatorial de los espermatozoidesdel segmento caput de epidídimo. Conel objetivo de encontrar una explicación a estas diferencias en elcomportamiento de la proteína nativa y la molécula químicamente modificada, realizamosestudios in vitro e in silico (SDS-PAGE, dicroísmocircular, perfil hidropático) dirigidos a determinar posibles diferencias en elcomportamiento de las mismas. Los resultados muestran que tanto el tamañomolecular, la estructura secundaria y la hidropaticidad de caltrin de ratafueron significativamente alterados por la unión a la molécula marcadora. Esposible que estas modificaciones sean las responsables de los diferentespatrones de unión de la proteína a la membrana de los espermatozoides, tal comose observa en las imágenes de microscopía de fluorescencia.