Clonado y expresion de la proteina caltrin de toro en Echerichia coli.

SOTTILE, EMILIANO; MIHELJ, PAULA; SZAPIRO, G; CORONEL, CARLOS E.; VAZQUEZ-LEVIN MH

Tucumán

Congreso; 3ra Reunion Conjunta de Sociedades de Biologia de la Republica Argentina; 2015

La proteína Caltrin (calcium transport inhibitor)de la secreción de vesícula seminal de toro se une a los espermatozoidesdurante la eyaculación e inhibe la incorporación de Ca2+ extracelular.Así, previene la exocitosis acrosomal espontánea y aumenta la capacidad fecundantein vitro de los espermatozoides epididimarios.Su purificación de plasma seminal es compleja, por lo que diseñamos un sistema deexpresión de Caltrin bovina-recombinante (Caltrin-rec) en bacterias. El ARNaislado de vesícula seminal fue purificado usando un protocolo estándar. El ADNcopia fue generado por retro-transcripción y amplificado por PCR usandocebadores específicos, conteniendo secuencias para el clonado direccional conenzimas de restricción. El fragmento amplificado y digerido fue insertado en unplásmido de expresión procariota. El plásmido con/sin (control) el inserto fuetransformado en bacterias E.coliBL21(DE3) competentes. Cuatro clones recombinantes fueron seleccionados paraevaluar la expresión de Caltrin-rec luego de la inducción de cultivosbacterianos líquidos con IPTG. Por SDS-PAGE, se detectó una banda proteica de ~5,5 kDa, en la que se identificaronpéptidos de Caltrin bovina por HPLC-MS/MS. Para optimizar la expresión deCaltrin-rec se ensayaron diferentes protocolos de inducción de la expresiónproteica; las células fueron lisadas por ultrasonido y analizadas por SDS-PAGE.El empleo de Caltrin-rec contribuirá a profundizar los estudios sobre su rol enel proceso de la fecundación.