CONTRATADOS
TARGOVNIK Hector Manuel
congresos y reuniones científicas
Título:
IMPACTO FUNCIONAL EN EL SPLICING DE LA NUEVA MUTACIÓN g.IVS17-1G>C EN EL GEN DE DUOX2 HUMANA RESPONSABLE DE DEFECTO DE ORGANIFICACIÓN DE YODO.
Autor/es:
BELFORTE, FIORELA SABINA; OSORIO LARROCHE, CAROLINA; CITTERIO, CINTIA ELIANA; MIRAS, MIRTA B.; TARGOVNIK , HÉCTOR MANUEL; RIVOLTA, CARINA MARCELA
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
Los defectos de organificación de yodo (IOD) representan el 10% de los casos de hipotiroidismo congénito de alta prevalencia (1/2000), siendo los principales genes afectados el de Tiroperoxidasa (TPO) y Dual Oxidasa2 (DUOX2). En el presente trabajo se propuso evaluar mutaciones en regiones consenso de splicing en el gen de DUOX2. Mediante rastreo por PCR-SSCP y posterior secuenciación del gen en una población de 40 pacientes con IOD, se identificó un compuesto heterocigota para dos nuevas mutaciones: g.IVS17-1g>c(intrón 17) y p.A1088fs1100(exón 24). Se evaluó bioinformáticamente el impacto de la sustitución puntual en la región consenso de splicing mediante el programa ESEfinder y se caracterizó funcionalmente mediante ensayo de minigenes. Para ello se amplificó el exón 18 de DUOX2 y sus regiones intrónicas flanqueantes a partir de ADN genómico del paciente, clonando el producto en pGEMT de manera de separar los alelos salvaje (WT) y mutante.Dichos alelos fueron identificados por secuenciación y sub-clonados en el vector pSPL3. Células Hela fueron transfectadas, evaluando por RT-PCR los fragmentos obtenidos a partir del pSPL3 recombinante WT y del mutante. La secuenciación de dichos fragmentos evidenció la pérdida de reconocimiento del sitio consenso de splicing en presencia de la mutación, la activación de un sitio críptico 3´aceptor en el intrón 17 que incorpora 14 bases intrónicas a la región codificante del exón 18 produciéndose así un corrimiento en el marco de lectura con un codón de terminación prematuro en el codón 807 de la proteína.Asimismo se observaron fenómenos de ?exon skipping? y activación de sitio críptico 5´dador en el exón 18. En conclusión se caracterizó un nuevo compuesto heterocigota responsable de IOD, identificando por primera vez sitios crípticos de splicing en el gen de DUOX2. El empleo de técnicas de biología molecular constituye una valiosa herramienta para la comprensión de la fisiopatología molecular de este tipo de defectos tiroideos.
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