INVESTIGADORES
RIVOLTA Carina Marcela
congresos y reuniones científicas
Título:
ANALlSIS MOLECULAR DEL GEN PAX8 EN HIPOTIRODlSMO CONGENITO POR DISEMBRIOGENESIS
Autor/es:
ESPERANTE, SEBASTIAN A; RIVOLTA, CARINA M; VARELA, VIVIANA; MIRAVALLE, LUCRECIA; HERZOVICH, VIVIANA; IORCANSKY, SONIA; TARGOVNIK, HECTOR M.
Lugar:
Mar del Plata, Argentina.
Reunión:
Congreso; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2004
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
El hipotiroidismo congénito tiene una incidencia de 1 en 4.000 nacidos vivos. En el 85% de los pacientes con este cuadro clínico heterogéneo se observa disembriogénesis sin presentar bocio y en el 15% restante, dishormonogénesis con bocio. En algunos pacientes la disembriogénesis está asociada con mutaciones en los genes responsables del desarrollo y el crecimiento de las células tiroideas: PAX8, TTF1, TTF2 y receptor de TSH. El gen PAX8 codifica para un factor de transcripción que participa en la embriogénesis de la glándula tiroides. En el presente trabajo se realizó la búsqueda de mutaciones en 60 pacientes no relacionados con hipotiroidismo congénito y sin bocio. A partir de ADN genómico purificado de sangre periferica se realizó un rastreo inicial por PCR-SSCP de los exones 1 al 12 del gen PAX8 y se secuenciaron los productos con movilidad alterada. Se identificó en el exón 7 una transición 834 C> T, que corresponde a un cambio T225M, y una transición 859 C> T, sin variación del aminoácido 233L. En el exón 9 se observó una transición 1166 G>A correspondiente a un cambio G336S y en el exón 12 una transición 1477 G>A sin variación del aminoácido 439A. Se realizaron estudios poblacionales por PCR-SSCP confirmando que las mutaciones identificadas no corresponden a polimorfismos. A partir de ARNm purificado de tiroides humana, la secuencia codificante de PAX8 se amplificó por RT-PCR utilizando primers específicos y fue clonada en el vector pcDNA68 en los sitios correspondientes a las enzimas EcoRI y BamHI. Se secuenciaron las 1360 pb del inserto. no observando ninguna variación con respecto a la secuencia de referencia. En conclusión se identificaron cuatro nuevas mutaciones, dos con cambio de aminoácido: T225M y G336S y 2 dos mutaciones silenciosas: 233L y 439A. Se clonó y se secuenció el cDNA del PAX8, el que será utilizado para estudiar la expresión del gen y el efecto de las mutaciones sobre la función de la proteína en su unión al DNA.