INVESTIGADORES
RAPISARDA Viviana Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
Regulación diferencial de la expresión de NADH deshidrogenasa-2 de Escherichia coli: influencia de los medios de cultivo e implicancia en el metabolismo del cobr
Autor/es:
SCHURIG, L.; VOLENTINI, S.; RODRÍGUEZ MONTELONGO, L.; RAPISARDA, V. A.
Lugar:
Rectorado UNT
Reunión:
Jornada; VI Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores “Augusto Palavecino”; 2005
Institución organizadora:
Centro de Estudiantes de la Facultad de Bioq., Qca. y Farm. de la UNT
Resumen:
NDH-2, es una enzima de cadena respiratoria de E. coli codificada por el gen ndh. Dicho gen es reprimido por FNR, un factor transcripcional que controla la expresión génica en respuesta a limitación en oxígeno. Así, ndh se inhibe por la regulación negativa de FNR en fase estacionaria. En nuestro laboratorio se encontró que cuando E. coli crece en el medio mínimo M9, ndh se expresa mayoritariamente en fase estacionaria. Sin embargo, en el medio mínimo MT o el medio rico LB los perfiles de expresión del gen concuerdan con lo informado en la bibliografía. Los objetivos de este trabajo fueron: a- identificar cuáles son los efectores en los medios de cultivo capaces de influir los perfiles de expresión del gen ndh y b- investigar la influencia que tienen éstos niveles de expresión en la resistencia a cobre, ya que NDH-2 es una enzima íntimamente relacionada con el metabolismo del metal. Los estudios se realizaron con la fusión del ndhp y lacZ, gen reportero que codifica la enzima b-galactosidasa. Se observó que el aumento de fosfato en los medios de cultivo (ya sea LB o MT), aumenta la actividad de b-galactosidasa en fase estacionaria, obteniéndose un patrón de expresión similar al de la bacteria crecida en M9. Lo inverso sucede cuando se disminuye la concentración de fosfato en el medio M9. Se obtuvieron resultados concordantes midiendo actividad de NDH-2 en membranas de una cepa wild-type en las distintas fases de crecimiento y en condiciones de expresión diferencial de ndh. Se encontró que el efecto del fosfato sobre la expresión del gen ndh es independiente de FNR. Se observó, además, que la mayor expresión del gen ndh en fase estacionaria, induce en la bacteria una mayor resistencia a altas concentraciones de cobre, un metal que es potencialmente tóxico para los seres vivos. Finalmente, el cobre afecta la expresión del gen en forma lineal e independientemente de FNR, por lo que se propone usar el sistema como marcador de cobre biodisponible.