INVESTIGADORES
RAPISARDA Viviana Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudios en mutantes de NADH deshidrogenasa-2, una enzima implicada en el metabolismo del cobre en Escherichia coli
Autor/es:
VILLEGAS, J. M.; VOLENTINI, S. I.; RODRÍGUEZ-MONTELONGO, L.; RAPISARDA, V. A.
Lugar:
Universidad Nacional de Asunción, Paraguay
Reunión:
Jornada; XV Jornadas de Jóvenes Investigadores de la AUGM; 2007
Institución organizadora:
AUGM
Resumen:
Introducción: NADH deshidrogenasa 2 (NDH-2) de E. coli es una flavoproteína de membrana con actividad Cu(II)-reductasa. Por estudios bioinformáticos se postularon 4 dominios en la enzima. El dominio III (DIII) estaría posiblemente implicado con la actividad enzimática y con la unión a Cu(I), y el dominio IV (DIV) se relacionaría con el anclaje de la proteína a la membrana plasmática. El objetivo del trabajo fue determinar la implicancia funcional y estructural del DIV y de las cisteínas (C) en el DIII. Materiales y métodos: Las mutantes se construyeron por mutagenésis sitio dirigida sobre el gen salvaje. Las actividades de la enzima se determinaron por técnicas espectrofotométricas y su localización celular por SDS-PAGE. Resultados: Las mutaciones en los residuos C315 y C318 del DIII conducen a la inactivación de NDH-2, mientras que la mutación del residuo C339 no produce modificaciones respecto a la proteína salvaje. La eliminación del DIV produce una disminución severa de la actividad enzimática y una posible degradación proteolítica de la enzima. Conclusiones: El motivo C315XXC318 es esencial para las actividades enzimáticas, mientras que el residuo C339 cumpliría un rol regulatorio. El DIV estaría implicado en la estabilidad y, posiblemente, en las actividades de la enzima.