Caracterización de dos mutantes en F424 del receptor H1 a histamina. Estudio de la interferencia en la señalización de otro receptor que transduce su señal a través de la misma vía.

ZAPPIA, CARLOS DANIEL; GRANJA GALEANO, GINA; FABIAN, LUCAS; TUBIO MARIA ROSARIO; SHAYO CARINA; DAVIO CARLOS; MONCZOR FEDERICO

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).

p { margin-bottom: 0.21cm; } p { margin-bottom: 0.21cm; } El receptor H1 a histamina (rH1) es un receptor acoplado a proteína G (GPCR) y señaliza a través de la proteína Gq. Previamente describimos que el rH1 puede adquirir una conformación inactiva que secuestra proteína G e interfiere en la señalización de otros GPCRs que transducen a través de la misma vía. Otros autores observaron que mutantes en la fenilalanina 303 del receptor A1b adrenérgico coinmunoprecipitan con la proteína G en forma inactiva. Mediante estudios de alineación encontramos que la F303 esta conservada en la mayoría de los GPCRs, siendo la F424 el homólogo para el rH1. El objetivo del presente trabajo es evaluar el efecto de mutar este residuo sobre la funcionalidad del rH1. Estimamos las interacciones que presenta F424 a través del modelado por homología con la estructura cristalina del receptor B2 adrenérgico, utilizando el servicio SwissModel y posterior minimización con el programa NAMD. Dado que el anillo aromático de la F424 posee interacciones C-C con I420, T428, N460, N464, L69, S114, e I115, evaluamos el efecto de eliminarlo o reemplazarlo por un residuo hidrofílico al mutar F por A y por S. En el primer caso se pierden dichas interacciones y en el segundo, además se gana un enlace puente de hidrógeno con el carbonilo de M421. En base a esto, realizamos dichas mutaciones en el rH1 y evaluamos en células HEK293T transfectadas la capacidad de las mutantes de interferir en la señalización de otro GPCR que utiliza la misma vía de transducción. Al evaluar la acumulación de Ca2+ intracelular en respuesta a distintas concentraciones de ATP, observamos que la presencia de las mutantes F424A y F424S y no del rH1 salvaje, reducen en un 30% y en un 50% respectivamente la respuesta del rATP sin modificar su CE50 (pCE50=5,8±0,1). Estos resultados sugieren que las mutaciones realizadas sobre el rH1 podrían inducir espontáneamente una conformación del receptor capaz de secuestrar Gq e interferir en la respuesta de otros GPCRs que señalicen por la misma vía.