PERFIL FARMACOLÓGICO Y SEÑALIZACIÓN DE UNA MUTANTE TRUNCADA DEL RECEPTOR H2 A HISTAMINA

TUBIO MARIA ROSARIO; COPSEL SABRINA; SHAYO CARINA; DAVIO CARLOS; MONCZOR FEDERICO

Mar del Plata

Congreso; L REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA,; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En nuestro laboratorio estudiamos la señalización y propiedades farmacológicas del receptor H2 a histamina (rH2) perteneciente a la superfamilia de GPCRs caracterizados por poseer siete pasos transmembrana y señalizar a través de la vía del AMPc. Contamos con una mutante del rH2 donde el codón que codifica para el ácido glutámico 229 fue reemplazado por un codón de terminación (rH2t). Esta mutante cuenta con los primeros cinco dominios transmembrana y una porción del tercer segmento intracelular. Para evaluar la expresión y funcionalidad del rH2t, se realizaron transfecciones transientes en células COS-7. En ensayos de unión, la afinidad del rH2t y del salvaje por el ligando de referencia resultó similar (73,9 ± 26,8 nM vs 86,8 ± 13,1 nM; p>0,05), pero los niveles de expresión del rH2t fueron menores que los del salvaje (1218 ± 190 dpm vs 5617 ± 384 dpm; p<0,05). Al realizar curvas dosis-respuesta con un agonista específico, el rH2t mostró una CE50 mayor (310,4 ± 1,1 nM vs 23,9 ± 2,1 nM; p<0,05) y una respuesta máxima menor (24,1 ± 4,1 pmol vs 63,6 ± 5,1 pmol; p<0,05) respecto al rH2. Resultados similares fueron obtenidos en células CHO transfectadas en forma estable y transiente. Por lo tanto, si bien el rH2t se expresa y localiza en la membrana celular, existe una diferencia en la señalización de ambas variantes, la cual no puede, en principio, adjudicarse a la interacción con el ligando ya que la afinidad fue similar. Sin embargo, el rH2t mostró un nivel de expresión menor, sugiriendo cierta alteración en el tráfico o la estabilidad de la proteína o de su RNAm. Esta podría ser la causa de la pérdida de potencia y eficacia del agonista específico. Ha sido descripto que la sola falta del extremo C-terminal del receptor H2 es suficiente como para impedir la correcta expresión del mismo. Sin embargo, nuestro trabajo muestra que una variante aún más corta que carece también de los dos últimos dominios transmembrana es capaz de expresarse y conservar su funcionalidad.