IBBM   21076
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA Y BIOLOGIA MOLECULAR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Utilización de baculovirus recombinantes para delivery génico en células de cáncer de mama triple negativo.
Autor/es:
GÓMEZ BERGNA SANTIAGO MANUEL; ROMANOWSKI VÍCTOR; MARCHESINI ABRIL; PIDRE MATIAS LUIS; GOTTARDO MARÍA FLORENCIA
Lugar:
Huerta Grande, Córdoba
Reunión:
Congreso; XXXIX Reunión científica anual de la sociedad argentina de virología; 2019
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
El desarrollo y utilización de estrategias de terapia génica para el tratamiento de enfermedades no infecciosas se ha incrementado en los últimos años. Los vectores virales son muy utilizados para este fin debido a que tienen la capacidad de ingresar en células de mamífero y conducir a la expresión de genes heterólogos. En particular, el baculovirus Autographa californica Multiple Nucleopolyhedrovirus (AcMNPV), es un virus patógeno de insectos que es capaz de transducir células de mamífero sin producir viriones infectivos.El cáncer de mama triple negativo (TNBC) es una neoplasia maligna caracterizada por la ausencia de la expresión de los receptores de estrógeno, progesterona y HER2. Estos tumores son muy agresivos y poseen una alta tasa de recurrencia. Además, pueden generar resistencia a la quimioterapia y la radioterapia. Diferentes trabajos demostraron que la sobreexpresión de miembros de la familia de proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP) es responsable de dicha resistencia. En particular, la proteína BIRC6 es el miembro más grande de esa familia (528 kDa) y su rol en TNBC se encuentra poco estudiado.En nuestro laboratorio, se generó un baculovirus recombinante que expresa un shRNA complementario a la región 3?UTR del gen birc6 humano, y que además conduce a la expresión de la proteína reportera dTomato en células de mamífero.Los objetivos de este trabajo consistieron en evaluar la capacidad de los baculovirus recombinantes de transducir células de carcinoma mamario triple negativo murino (F3II) y humano (MDA-MB-231), optimizar el protocolo de transducción, y evaluar el efecto del silenciamiento de BIRC6 sobre las células utilizadas.Para ello, se incubaron las líneas celulares con diferentes cantidades de partículas baculovirales, con o sin el agregado de polietilenimina. Se evaluó la eficiencia de transducción mediante la expresión de la proteína dTomato. Posteriormente, se evaluaron los niveles de apoptosis inducida por la transducción viral, mediante la técnica de TUNEL. Se evidenció el silenciamiento de la proteína BIRC6 mediante inmunofluorescencia indirecta.Se observaron células fluorescentes luego de la incubación con el baculovirus recombinante, producto de la transducción en las diferentes lineas celulares. Además, se observó una diferencia estadísticamente significativa en los niveles de apoptosis inducidos en las células transducidas con el baculovirus silenciador en comparación con las transducidas con un baculovirus control. Por último, se observó mediante microscopía confocal una disminución en los niveles de expresión de BIRC6 en aquellas células efectivamente transducidas con el baculovirus silenciador.Estos resultados indican que las células de carcinoma mamario triple negativo murino y humano son permisivas para la transducción mediada por baculovirus. Además, el baculovirus recombinante generado fue capaz de silenciar la expresión de BIRC6 tanto en células humanas como murinas e inducir apoptosis.