Detección de la proteína L del virus Theiler en células en cultivo

CARRERA SILVA EA; GOMEZ RM; GIRARDI JI; FERRER MF

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Sociedad Argentina de Virología

El virus de la encefalomielitis murina de Theiler (TMEV) agrupa un número de virus entre los que se distinguen 2 subgrupos. El primero, representado por la cepa GDVII produce una enfermedad aguda con lesiones en la sustancia gris del sistema nervioso central (SNC), alta mortalidad y ausencia de persistencia viral. En contraste, las cepas del subgrupo TO, como la cepa DA, producen una enfermedad aguda más leve del SNC donde la mayoría de los animales sobreviven. Sin embargo, al cabo de varias semanas desarrollan diversos grados de alteraciones motoras incluyendo parálisis asociada a un proceso desmielinizante de la sustancia blanca de la médula espinal. El virus persiste en forma restringida a bajo título y tanto la respuesta inmune del huésped como el virus contribuyen al proceso patológico. Por su semejanza a la esclerosis múltiple humana, la enfermedad desmielinizante murina inducida por el TMEV (TMEV-IDD) se utiliza como modelo experimental de la misma. TMEV pertenece al género Cardiovirus de la familia Picornaviridae. El genoma viral es de 8100 nucleótidos compuesto por ARN de simple cadena y polaridad positiva. Posee una región no traducida de 1065 nucleótidos importante en la traducción y la replicación. En el nucleótido 1066, un AUG es utilizado para la traducción de un largo segmento de lectura (ORF). La proteína L es una pequeña proteína acídica de 76 aminoácidos localizada en el extremo amino de la poliproteína que posee un dominio en dedos de zinc, un dominio acídico y un dominio serina/treonina. La deleción de L produce virus de la cepa DA que no inducen IDD y crecen pobremente en células L-929 que producen IFN-I normalmente pero replican adecuadamente en células BHK-21 que poseen un defecto en la producción de IFN-I. Estudios posteriores mostraron que L bloquea la transcripción de IFN-I e interfiere con el transporte nucleocitoplásmico resultando en un bloqueo de la traducción celular ya que el ARNm celular queda retenido en el núcleo y aquellas proteínas críticas para la replicación viral no se encuentran disponibles en el citoplasma. Además, L es proapoptótica en células del SNC aunque aún no se ha clarificado la relación entre el bloqueo de la traducción celular y la apoptosis que depende del dominio serina/treonina. Con el objetivo de poder estudiar la proteína L a nivel celular, se generó un virus recombinante que contiene dentro de la proteína L el epitope de la hemaglutinina del virus influenza (HA). Luego de obtener el virus infeccioso por transcripción in vitro del clon infeccioso y transfección del ARN resultante, se comprobó que el mismo replica con títulos similares al clon parental en células BHK-21. En estudios de inmunofluorescencia, las células infectadas pudieron ser detectadas utilizando un anticuerpo monoclonal anti-HA validando a TMEV DA L-HA como una herramienta útil para el estudio de la función de esta proteína.