Caracterización de un aislamiento argentino del granulovirus de Spodoptera frugiperda, SfGV

KB SABALETTE, J NIZ, R SALVADOR, A SCIOCCO-CAP, V ROMANOWSKI, ML FERRELLI

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología - II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología - Asociación Argentina de Microbiología

0223 - CARACTERIZACIÓN DE UN AISLAMIENTO ARGENTINO DEL GRANULOVIRUS DE SPODOPTERA FRUGIPERDA, SFGVKB Sabalette1, J Niz2, R Salvador2, A Sciocco-Cap2, V Romanowski1, MLFerrelli11 Instituto de Biotecnología y Biología Molecular (IBBM-UNLP-CONICET), Argentina. 2 Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola - INTA Hurlingham, Argentina.La oruga militar tardía, Spodoptera frugiperda, es una plaga importante del cultivo de maíz en nuestro país y resto de América. Una de las estrategias utilizadas para su control, además del uso de insecticidas químicos, ha sido la utilización de maíz transgénico que expresa la toxina Cry 1F (maíz Bt). Recientemente se han informado casos de resistencia en Brasil y Puerto Rico. Una alternativa para el control de esta plaga surge del uso de baculovirus, una familia de virus específicos de insectos. El nucleopoliedrovirus SfMNPV (género Alphabaculovirus) y el granulovirus SfGV (género Betabaculovirus) solo infectan S. frugiperda. Diferentes aislamientos de SfMNPV han sido probados con éxito como bioinsecticidas mientras que SfGV podría ejercer una acción sinérgica con alfabaculovirus. Existen escasos reportes sobre SfGV, y recientemente se dio a conocer el primer genoma de un aislamiento de este virus, aislado en Colombia. En este trabajo, nos propusimos caracterizar un aislamiento de SfGV autóctono (SfGV-ARG) (Castelar, Buenos Aires) conservado en la colección del IMYZA y compararlo con otros aislamientos del virus. El SfGV-AR fue amplificado en larvas de S. frugiperda de cuarto estadio. A partir de un macerado de larvas muertas, se purificaron los cuerpos de oclusión (OB). Se realizó un SDS PAGE para analizar el perfil proteico de los OBs. Además se extrajo su DNA, el que se utilizó como molde para PCRs y para digestión con enzimas de restricción. Se amplificaron regiones de los genes de granulina, lef-8 y lef-9 con primers degenerados de la familia Baculoviridae. Los fragmentos de PCR se purificaron a partir de gel de agarosa y se secuenciaron. Las secuencias obtenidas fueron analizadas por blastn y se utilizaron para comparar con las de otros baculovirus mediante análisis filogenético. Se realizó el análisis del patrón de restricción de DNA con las enzimas EcoRI, BamHI, HindIII y BglII. El perfil proteico por SDS-PAGE mostró la presencia de una proteína mayoritaria de los OBs en aproximadamente 29 kDa, lo que concuerda con el peso molecular de las granulinas de todos los GVs. Las secuencias parciales obtenidas se analizadas por blastn, obteniendo un alto porcentaje de identidad (>98%) con las secuencias de otros aislamientos de SfGV. Luego estas se utilizaron para realizar alineamientos con sus homólogas del género Betabaculovirus. Los alineamientos concatenados se utilizaron para analizar las distancias por el modelo Kimura-2-parameter que confirmó que nuestro aislamiento se trata de la especie SfGV. Además se analizó la filogenia por Minumum Evolution y Maximum Likelihood lo que permitió relacionar a SfGV-ARG con el resto de los betabaculovirus, indicando que el más cercano evolutivamente es el aislamiento SfGV A12-4. El análisis de restricción permitió estimar el tamaño del genoma en 136 kpb. La caracterización de este granulovirus tanto a nivel molecular como biológico nos permitirá evaluarlo para su uso en el control biológico de plagas.