AISLAMIENTO Y CARACTERIZACION DE PLÁSMIDOS AISLADOS DE ACINETOBACTER SPP. MULTIRESISTENTES A ANTIBIÓTICOS

SALTO, I. P.; TORRES TEJERIZO, G. A.; MARTINI, C; LÓPEZ, J. L.; ALBICORO, F.; SALAS, M, E.; LOZANO, M. J.; DEL PAPA, M.F.; FERNÁNDEZ CANIGIA, L.; RODRÍGUEZ, V.; FREULER, C.; DURLACH, R.; WIBBERG, D.; SCHLÜTER, A.; LAGARES, A.; PISTORIO, M.

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Introducción: Los plásmidos y otros elementos móviles desempeñan un papel importante en la adaptación de las bacterias a los entornos cambiantes donde pueden hallarse. Un claro ejemplo es la actual epidemia de patógenos humanos con múltiples resistencias a antibióticos, la cual se debe en parte a la propagación de información genética por transferencia horizontal. Los aislamientos bacterianos contienen a menudo plásmidos pequeños que abarcan solamente genes de la replicación y algunos genes asociados a actividades no esenciales en condiciones de crecimiento en el laboratorio. Sin embargo otros plásmidos son vehículos portadores de información ligada a necesidades funcionales transitorias (resistencias a antibióticos, funciones simbióticas y patogénicas, etc). Por esta razón, la obtención y caracterización de la información genética asociada a plásmidos, en particular, y al moviloma, en general, permitirá diseñar nuevas estrategias con el fin de ayudar a desplazar los posibles plásmidos de resistencia a antibióticos de ambientes hospitalarios, y con ello, disminuir la frecuencia de aparición de aislamientos multiresistentes. Materiales y Métodos: Se abordó la búsqueda de plásmidos bacterianos a partir de aislamientos multiresistentes hospitalarios. Se trabajó con 64 aislamientos de Acinetobacter spp, provenientes de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires, seleccionados por presentar resistencia a 3 o más agentes microbianos. La existencia de plásmidos fue demostrada mediante geles de lisis in situ. A las cepas que poseían replicones extracromosomales se les realizó una extracción de ADN siguiendo el método de Kieser (Plasmid 1984 12:19-36) en pequeña y gran escala. Posteriormente, los plásmidos fueron purificados mediante gradientes en CsCl y se secuenció la muestra usando la tecnología MiSeq-Illumina. Por último, las lecturas obtenidas fueron ensambladas, anotadas y analizadas in silico. Resultados: En un 89% de los aislamientos analizados se detectó la presencia de plásmidos por medio de los geles de lisis in situ. Se observaron distintos perfiles, tanto en cantidad como en tamaño de los replicones. Los tamaños de los replicones, estimados según su migración relativa a plásmidos de PM conocido, varían entre 2 y 60 kpb. Los resultados de la secuenciación mostraron un total de 1.419.341 lecturas que cubrieron un total de 347.374.930 pb, alcanzando un valor de cobertura de aproximadamente 650. Se realizó el ensamblado de las lecturas obtenidas y se obtuvieron 40 contigs, de los cuales 23 corresponden a 19 plásmidos completos. El análisis preliminar de los datos obtenidos en la secuenciación permitió concluir que el método de detección, aislamiento y purificación de estos plásmidos fue exitoso. Esto nos permitirá extender la búsqueda de plásmidos en Acinetobacter spp. y profundizar la caracterización de su moviloma mediante el análisis molecular y funcional de la información contenida en estos replicones.