Efecto del medio de cultivo suplementado con diferentes concentraciones de zinc sobre la integridad del ADN y la apoptosis de células del cúmulus

ANCHORDOQUY, J.M., ANCHORDOQUY, J.P., PICCO, S.J., SEOANE, A., ROSA, D.E., MATTIOLI, G., PERAL GARCÍA, P. Y FURNUS, C.

Viedma

Congreso; 33/ Congreso Argentino de Producción Animal; 2010

Asociación Argentina de Producción Animal (AAPA)

El Zinc (Zn) cumple un rol esencial en el funcionamiento del ADN. Alteraciones en la maduración nuclear y citoplasmática de los ovocitos influyen directamente en la obtención de bajas tasas de gestación. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la tasa de apoptosis y el índice de daño en el ADN de células del cúmulus bovino, por la exposición a diferentes concentraciones de Zn durante la maduración in vitro de ovocitos (MIV). Los complejos ovocitocúmulus (COCs) se obtuvieron de ovarios de vaquillonas de frigorífico. Los ovarios se colectaron en días diferentes, y en cada día se obtuvieron 200 COCs, usando 50 COCs por tratamiento. Los COCs se maduraron in vitro en medio TCM 199 con suero, FSH y LH, durante 24 hs a 39/C en atmósfera gaseada al 5% de CO2. Los COCs se cultivaron con distintas concentraciones de ZnSO4 agregadas al medio de MIV: Control (C)= medio de MIV sin agregado de Zn, Deficiencia (D= 0.7 :g/ml), Deficiencia marginal (DM= 1.1 :g/ml) y Adecuado (A= 1,5 :g/ml). El tratamiento A corresponde a concentraciones plasmáticas normales en bovinos. El análisis del daño del ADN se realizó mediante electroforesis en gel de células aisladas (Ensayo Cometa, versión alcalina). Las células de cada corrida electroforética fueron teñidas y analizadas con un sistema de captura y digitalización de imágenes acoplado a un software de análisis de imágenes microscópicas. El índice de daño es el resultado de la relación entre la cantidad de ADN migrado en el gel (ADN fragmentado, “cola del cometa”) con la cantidad de ADN que no lo hizo (“cabeza del cometa”). La tasa de apoptosis fue evaluada utilizando la tinción de Anexina-V. El índice de daño en el ADN y la tasa de apoptosis fueron