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El cobre (Cu), manganeso (Mn), selenio (Se) y zinc (Zn) son minerales traza esenciales involucrados en una gran variedad de procesos fisiológicos. Sólo los espermatozoides con acrosoma intacto tienen la capacidad de adherirse a la zona pelúcida (ZP) y fecundar. Los objetivos del presente estudio fueron evaluar el efecto de la suplementación con Cu, Mn, Se y Zn en el medio de fertilización in vitro (FIV) sobre; 1) la integridad acrosomal (IA) y 2) el número de espermatozoides unidos a ZP (NEUZP). El semen descongelado fue incubado en medio Fert-TALP suplementado con Cu (0,4 µg/ml), Mn (5 ng/ml), Se (100 ng/ml), Zn (0,8 µg/ml), Cu+Mn+Se+Zn o sin suplementar (Control) a 39°C con 5% de CO2 en aire y humedad a saturación. Para el Objetivo 1, el semen fue evaluado a las 0, 1 y 2 horas. La IA se evaluó mediante la técnica de aglutinina de Pisum sativum conjugada con fluoresceína. Para el Objetivo 2, el NEUZP se determinó mediante la tinción con Hoechst 33342 luego de 2 h de co-incubación del semen con ovocitos bovinos desnudos obtenidos a partir de ovarios de frigorífico. Los datos de IA se analizaron mediante una regresión logística, mientras que el NEUZP se analizó mediante una regresión lineal (SAS Institute, Cary, NC). La suplementación con Zn y Cu+Mn+Se+Zn incremento el número de espermatozoides con el acrosoma intacto luego de 1 h de incubación, mientras que luego de 2 h ese efecto fue observado con la suplementación de Zn y Se (p˂0,05). El NEUZP fue incrementado con la suplementación con Cu, Se y Zn (p˂0,05). En conclusión, este estudio indica que el agregado de Se, Zn y Cu+Mn+Se+Zn al medio de FIV favorece la IA mientras que el Cu, Se y Zn incrementan la cantidad de espermatozoides que se unen a la ZP.