Presencia del transportador de cobre CTR1 en ovocitos bovinos durante la maduración in vitro.

ANCHORDOQUY J.P; ANCHORDOQUY J.M.; LIZARRAGA R. ; NIKOLOFF N; CARRANZA A.; PASCUA A.M.; FURNUS C.C.; ANCHORDOQUY J.P; ANCHORDOQUY J.M.; LIZARRAGA R. ; NIKOLOFF N; CARRANZA A.; PASCUA A.M.; FURNUS C.C.

Córdoba

Simposio; XII Simposio Internacional de Reproducción Animal.; 2017

IRAC BIOGEN

La suplementación con cobre (Cu) al medio de cultivo mejora la maduración in vitro (MIV) de ovocitos bovinos. Sin embargo, hasta la fecha no se ha demostrado la presencia en el ovocito de su principal transportador, el CTR1, durante la MIV. El objetivo de este trabajo fue evaluar la presencia del transportador de Cu CTR1 en ovocitos bovinos durante la MIV. Para ello, los complejos ovocito-cúmulus bovinos obtenidos a partir de ovarios de frigorífico fueron madurados in vitro durante 24 hs en TCM 199 con 10% SFB, FSH y estradiol. La incubación se realizó a 39°C con 5% de CO2 y humedad a saturación. La presencia del transportador en el oolema fue evaluada por inmunomarcación al inicio (0hs: ovocitos inmaduros), y luego de 2, 8, 16, 20 y 24 hs de MIV. Los ovocitos fueron denudados por pipeteo y fijados en formaldehido al 0,01% en PBS por 10 min. Luego, fueron incubados en PBS/3% BSA (p/v) a 37°C por una hora e incubados con el anticuerpo primario anti-CTR1 durante toda la noche a 4°C. Se realizaron controles negativos incubando los ovocitos en PBS/1% BSA (p/v) en lugar de hacerlo con el anticuerpo primario. Luego de tres enjuagues en PBS/1% BSA (p/v) fueron incubados con el anticuerpo secundario marcado con fluoresceína a 37°C por una hora, enjuagados tres veces en PBS/1% BSA (p/v) y observados bajo microscopio de fluorescencia. No se detectó inmunomarcación para CTR1 en ovocitos inmaduros (0hs), sin embargo, este transportador estuvo presente a lo largo de la MIV (2, 8, 16, 20 y 24 hs). Este es el primer trabajo que revela la presencia de CTR1 en ovocitos de mamíferos durante la MIV. Este resultado podría reflejar la necesidad de los ovocitos bovinos de incorporar Cu durante la maduración in vitro y remarca la importancia de este mineral en dicho proceso.