EFECTO DE LA SUPLEMENTACION DE CONCENTRACIONES DE GHRELINA SIMILARES A UN BALANCE ENERGÉTICO POSITIVO Y NEGATIVO SOBRE LA MADURACION IN VITRO DE OVOCITOS BOVINOS

SIRINI, M.A.; ANCHORDOQUY JP; ANCHORDOQUY JM; PASCUA AM; TESTA, J.A.; FURNUS, C.C.

Córdoba

Simposio; 11 Simposio Internacional de Reproducción Animal; 2015

Instituto de Reproducción Animal de Córdoba

EFECTO DE LA SUPLEMENTACION DE CONCENTRACIONES DE GHRELINA SIMILARES A UN BALANCE ENERGÉTICO POSITIVO Y NEGATIVO SOBRE LA MADURACIONIN- VITRO DE OVOCITOS BOVINOS M.A. Sirini, J.P.Anchordoquy, J.M.Anchordoquy, A.M. Pascua, J.A. Testa, C.C. Furnus. Instituto de Genética Veterinaria ?Fernando N Dulout? (IGEVET), UNLP/CONICET. E-mail: matiassirini@hotmail.com.ar El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la suplementación de ghrelina en el medio de maduración in vitro (MIV) de ovocitos bovinos sobre el área de expansión del cúmulus (AEC), el número de células del cúmulus (CC), la tasa de maduración nuclear (MN) y la tasa de pronúcleos luego de la FIV (PN). Los ovocitos obtenidos de ovarios de frigorífico se maduraron 24 h en medio TCM 199 con 10% de suero fetal bovino y FSH a 39°C en5% CO2. Los ovocitos se maduraron en medio sin suplementar (Control) y con diferentes concentraciones de ghrelina: similar a la de un bovino en Balance Energético Positivo (BEP, 20 pM); intermedia (40 pM) y BE negativo (BEN, 60pM). El AEC se analizó con un software para imágenes digitalizadas procesándose 50 COCs por tratamiento, y el número total de CC se estimó por recuento en cámara de Neubauer, procesándose 120 COCs por tratamiento. Ambos parámetros se midieron antes (T0) y después (T24) de la MIV. La tasa de MN se evaluócon el fluorescente Hoechst 33342 mediante la presencia de CP + MII (cuerpo polar + placa metafásica).A las 16 horas post-FIV se evaluó la tasa de PN con Hoechst 33342. Los datos se analizaron con un diseño en bloque completamente aleatorio, donde cada frigorífico fue tomado como un bloque. Se realizó una regresión logística (variables MN y PN) y una regresión lineal mixta (para AEC y el número de CC) con el programa SAS 9.0. El modelo incluyó los efectos del bloque y del tratamiento. No se encontraron diferencias significativas entre los distintos tratamientos en AEC, número de CC y MN. Sin embargo, la tasa de PN fue inferior en los ovocitos madurados con ghrelina (Tabla 1). Tabla 1: Efecto de la ghrelina sobre la maduración in vitro de ovocitos bovinos. MIV Ghrelina AEC CC/COC MII+CP PN (pM) (µm2) (n) % (n) % (n) T0 139271±40748a 8341,6 ±1497,87ª T24 0 523541 ± 40748b 9409,5 ± 1497,87a 95,0 (95/100)a 68,18 (45/66)a 20 448626 ± 39196b 8395,8 ±1497,87a 90,50 (88/97)a 44,44 (28/63)b 40 462383 ± 40748b 9434,3 ± 1497,87a 98,0 (98/100)a 41,66 (25/60)b 60 461749 ± 42443b 11215 ± 1497,87a 91,40 (86/94)a 37,28 (22/59)b (a,b) Distintos superíndices dentro de la misma columna p ≤ 0,05. Los datos correspondientes a AEC y CC/COC se expresan como el promedio ± ESM. Los datos correspondientes a MII + CP y PN se expresan como porcentajes. En todos los experimentos se realizaron 4 repeticiones en díasdistintos. En conclusión, el agregado de concentraciones crecientes de ghrelina al medio de MIV no afectó los parámetros de maduración evaluados. Se sabe que la ghrelina aumenta los niveles de Ca+2 intracitoplasmáticos, lo que podría alterar la formación de los PN luego de la FIV, mediante la activación prematura de los gránulos corticales.