EVALUACION DE UN SISTEMA DE AMPLIFICACION ISOTERMICA PARA LA DETECCION DE ESCHERICHIA COLI O157 A PARTIR DE CARNE BOVINA MOLIDA

DE LA TORRE JULIÁN; LINARES LUCIANO HORACIO; ORTEGA EMANUEL; ALIVERTI FLORENCIA; BRUSA VICTORIA; ALIVERTI VIRGINIA; GALLI LUCÍA; PERAL GARCÍA PILAR; COPES JULIO ALBERTO; LEOTTA GERARDO ANÍBAL

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Latinoamericano de Microbiología e Higiene de Alimentos. IV Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos. III Simposio Argentino de Conservación de Alimentos; 2012

Asociación argentina de microbiología

Escherichia coli O157:H7 es un patógeno asociado a enfermedades transmitidas por alimentos. La infección por E. coli O157:H7 puede causar casos esporádicos o brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). El Código Alimentario Argentino (CAA), en su artículo 255 establece ausencia de este microorganismo en 5 muestras de 65 g de carne bovina molida. El objetivo del presente trabajo fue evaluar un sistema automatizado de amplificación isotérmica para la detección genotípica de E. coli O157 (incluido H7) en muestras de carne bovina molida. Se contaminaron experimentalmente 50 muestras de 65 g de carne con 5 cepas de E. coli O157:H7 y una cepa de E. coli O157:HNT no toxigénica (en concentraciones 10 ufc/65 g a 10000000 ufc/65 g), aisladas en Argentina a partir de alimentos cárnicos. Las muestras se resuspendieron en 585 ml de agua peptonada bufferada y fueron incubadas por 24 h a 42ºC. Para determinar la especificidad de la técnica se analizaron 8 cepas no-E. coli relacionadas en concentraciones 10000 ufc/65 g y 100000 ufc/65 g. Todos los ensayos se realizaron por duplicado a excepción de las muestras contaminadas con la cepaE. coli O157:HNT. La concentración bacteriana se determinó por recuento en agar PCA (plate count agar) por duplicado. El tamizaje se realizó con el sistema comercial Molecular Detection System 3MTM(MDS) que permite amplificar distintas regiones del genoma de E. coli O157 mediante múltiples iniciadores y detectarlos por bioluminiscencia, el mismo emplea un control negativo, un control de reactivos y un control de matriz. La extracción de ADN de las muestras se realizó según indicaciones del fabricante. Todas las muestras contaminadas con diferentes concentraciones de E. coli O157 fueron positivas a partir de los 15 minutos y el ensayo pudo completarse en 75 minutos, determinándose un límite de detección entre 1 y 10 ufc/65 g de alimento. Se obtuvo un 100% de inclusividad y un 100% de exclusividad. Fue posible demostrar la utilidad de los ensayos moleculares rápidos, sensibles y específicos, y de cómo estos se pueden aplicar directamente en el campo de la industria alimenticia para detectar patógenos circulantes en Argentina.