MADURACIÓN IN VITRO SECUENCIAL DE OVOCITOS BOVINOS: EFECTO DEL VEGF Y LA CISTEAMINA

ANCHORDOQUY JM; ANCHORDOQUY JP; PICCO SJ; PERAL GARCÍA P; ERRECALDE AL; FURNUS C

Mar del Plata

Congreso; 34°Congreso Argentino de Producción Animal; 2011

Asociación Argentina de Producción Animal y American Society of Animal Science

El factor de crecimiento de endotelio vascular (VEGF) y sus receptores se expresan en el citoplasma del ovocito y en las células del cúmulus durante el comienzo de la maduración in vitro. Altos niveles de glutatión (GSH) en el ovocito bovino aumentan la tasa de desarrollo embrionario hasta el estadio de blastocisto. En células de mamífero los niveles intracelulares de GSH modulan el efecto del VEGF disminuyendo su funcionalidad. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue investigar el efecto del VEGF y de la cisteamina (estimulador de la síntesis de GSH) sobre el desarrollo embrionario hasta el estadio de blastocisto. Para ello, los ovocitos bovinos obtenidos a partir de ovarios de frigorífico se maduraron 24 horas in vitro en medio TCM 199 suplementado con 10% de suero bovino fetal y FSH, a 39°C con 5% CO2 y humedad a saturación. Luego se fertilizaron in vitro (FIV). Los presuntos cigotos se cultivaron in vitro durante 8 días. La tasa de clivaje se evaluó 48 h post-inseminación. Los datos se analizaron con ANOVA luego de la transformación angular y el test de Student-Newman-Keuls a posteriori, se trabajó con un nivel de significancia p < 0,05. Para estudiar el efecto del VEGF y la cisteamina se diseño una maduración secuencial en dos etapas: Etapa I (0-3 horas) con o sin agregado de 500 ng/ml VEGF y Etapa II (4-24 horas) con o sin agregado de 100 μM de Cisteamina. Los complejos ovocito-cúmulus se incubaron en. a) medio sin suplementar durante 24 horas (Control); b) Etapa I: medio sin suplementar - Etapa II: 100 μM/ml Cisteamina (Cisteamina); c) Etapa I : 500 ng/ml VEGF ? Etapa II: medio sin suplementar (VEGF); d) Etapa I: 500 ng/mL VEGF - Etapa II: 100 μM Cisteamina (VEGF + Cisteamina) y e) Etapa I + Etapa II: 500 ng/ml VEGF + 100 μM/ml Cisteamina, ambos suplementos durante las 24 horas de la MIV (VEGF + Cisteamina 24 h). Todos los valores están expresados como el promedio ± ES (1236 COCs, 6 repeticiones). La Tabla 1 muestra las tasas de clivaje y de blastocistos. En conclusión, este estudio indica que: a) el VEGF y la cisteamina agregados al medio de maduración aumentan la capacidad de desarrollo posterior hasta el estadio de blastocisto, b) el efecto combinado de ambos suplementos, cuando se los incorpora en forma secuencial durante la maduración in vitro, es aún mayor que la acción individual de cada uno de ellos y c) la permanencia del VEGF y la cisteamina durante 24 horas disminuyó la tasa de desarrollo a porcentajes similares al control sin suplementar.Tabla 1 Capacidad de desarrollo de ovocitos bovinos madurados in vitro en un sistema de maduración secuencial en dos etapas con VEGF y cisteamina.(%)Control(n =300)Cisteamina(n = 314)VEGF(n = 300)VEGF + Cisteamina(n = 320)VEGF + Cisteamina (0-24)(n = 302)Clivados69,5± 2,1a76,3± 0,7b74,0±1,2b79,9 ± 3,7b70,0 ± 2,1ªBlastocistos/ovocitos26±1,8a38,2± 1,0b32,3±2,0b47,0 ± 2,1c25,4 ± 2,3ªLos valores indicados con diferentes letras dentro de cada fila son diferentes (p < 0,05).