La deficiencia de TNFRp55 aumenta la actividad inflamatoria de macrófagos peritoneales frente a la estimulación con HKY ó LPS de Yersinia enterocolitica O:3.

ELIÇABE JAVIER, DI GENARO SILVIA.

La Falda, Córdoba

Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología, XIReunion Cientifica del Grupo Rioplatense de Citometria de Flujo; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología (SAI) y Grupo Rioplatense de Citometria de Flujo

El receptor p55 de TNF-a (TNFRp55) media la mayoría de los efectos de esta citoquina. Ratones TNFRp55-/- desarrollan artritis reactiva (ARe) luego de la infección con Yersinia enterocolitica.  Macrófagos predominan en las infiltraciones de las sinovias de pacientes con ARe. El objetivo del trabajo fue analizar el efecto de la deficiencia de TNFRp55 en macrófagos peritoneales estimulados con Yersinia muerta por calor (HKY) o lipopolisacárido de Y. enterocolitica O:3 (LPS O:3). Macrófagos peritoneales fueron obtenidos de ratones C57BL/6 wild type y TNFRp55-/- 4 días después de la estimulación con caldo tioglicolato al 4 %. Células adherentes fueron estimuladas con diferentes concentraciones de LPS O:3 (10 ng, 100 ng ó 1 mg) y HKY (106, 107 ó 108 bacterias/ml). Después de 24 hs de estimulación, se determinaron en los sobrenadantes de cultivo los niveles de óxido nítrico (NO) por la reacción de Griess, y de interleuquina (IL)-6 por ELISA de captura.  La expresión de óxido nítrico sintetasa inducible (iNOS) fue analizada por Western blot. Macrófago TNFRp55-/- produjeron mayores niveles de NO luego de ser estimulados con 107 ó 108 HKY (p<0,01, y p<0,009,  respectivamente). El mismo efecto fue observado luego de la estimulación con 100 ng ó 1 mg de LPS O:3 (p<0,01, p<0,005, respectivamente). Estos resultados correlacionaron con el aumento de expresión de iNOS. Este efecto fue acompañado de un incremento en los niveles de IL-6 en sobrenadantes de cultivo de macrófagos TNFRp55-/- estimulados con 10 ng, 100 ng ó 1 mg de LPS (p<0.0004, p<0.05 y  p<0.007, respectivamente). La estimulación de los macrófagos TNFRp55-/- con 100 ng de LPS O:3 en presencia de 15 mg de polimixina B disminuyó los niveles de NO e IL-6 a niveles basales (p<0,0027 y p<0,0008, respectivamente). La estimulación con un ligando del receptor TLR2, tal como zimosán, no indujo incremento de NO en macrófagos TNFRp55-/-.  Estos resultados indican que la deficiencia de TNFRp55 aumenta la actividad pro-inflamatoria de macrófagos peritoneales en respuesta a HKY o LPS de Y.  enterocolitica O:3.