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http://redbioargentina.org.ar/simposio2015/resumenes/presentados/BH4.pdf BH4Producción y validación de anticuerpos anti-mieloperoxidasa humana y anti-3-nitrotirosina: Racional y potenciales aplicacionesRinaldi-Tosi, ME1; Della Vedova, MC1; Muñoz MD1; Gomez Mejiba, SE2 & Ramirez, DC1 1Laboratorio de Medicina Experimental y Traduccional, 2Laboratorio de Terapéuticas Experimentales, Instituto Multidisciplinario de Investigaciones Biológicas-San Luis (IMIBIO-SL), CONICET, Universidad Nacional de San Luis, San Luis, ArgentinaLa mieloperoxidasa (MPO) es una proteína mayoritaria en neutrófilos y monocitos, pero también su síntesis puede ser inducida en macrófagos en sitios de inflamación crónica, incluyendo tejidos en enfermedades metabólicas, neurogenerativas, autoinmunes como así también del cáncer y el envejecimiento. La activación de los neutrófilos y macrófagos en los sitios de injuria lleva a la producción de especies bioquímicas reactivas a través del interacción entre la MPO, NADPH oxidasa-2 y la óxido nítrico sintetasa inducible. De esta interacción resultan un numero de especies reactivas que incluyen acido hipocloroso (HOCl), radical superóxido y oxido nítrico, peroxinitrito y cloruro de nitrilo (NO2Cl) las cuales dejan como principales huellas nitración y clorinación de residuos tirosina, triptófano e histidina, como así también guanina/adenina; y la modificación oxidativa de grupos tioles y metionina. Estas modificaciones afectan la estructura y función de proteínas y ácidos nucléicos. Por lo tanto, la visualización y cuantificación de MPO y proteínas nitradas en fluidos, células y tejidos biológicos son de gran valor, tanto para el diagnóstico como para el seguimiento procesos inflamatorios. Debido la trayectoria y experiencia que poseen nuestros laboratorios el área de estrés oxidativo e inflamación y en el desarrollo de nuevas tecnologías, y visto la dificultad que muchos laboratorios de nuestro país tienen para la compra e importación de anticuerpos, nos propusimos desarrollar reactivos, tecnologías y servicios para soportar sus proyectos de I+D. En esta etapa desarrollamos dos anticuerpos que tendrían mayor aplicación en el diagnostico y seguimiento de procesos inflamatorios crónicos. En efecto reportamos la producción y validación de anticuerpos policlonales en conejo anti-MPO humana y anti-nitrotirosina. La validación de estos sueros policlonales fue realizada por ELISA contra MPO humana y por Western blot contra MPO humana, neutrófilos humanos/ratón y homogenato de pulmón de ratones inyectados con endotoxina bacteriana. El titulo de anticuerpos por ELISA y Western blot para el suero anti-3-NT y anti-MPO es de 1:5.000 y 1:10.000, respectivamente. Los anticuerpos producidos y validados serán utilizados para el desarrollo de kits diagnósticos y están disponibles para laboratorios de nuestro país que garanticen estudios de aplicabilidad y de reactividad cruzada por otras técnicas inmunológicas. SOPORTADO POR PROICO 2-3214 (a DCR, FQByF-UNSL), PROICO 10-0414 (a SEGM, FCS,UNSL) y PICT-2014-3369 (a DCR, ANPCyT)